项目目标:针对腺病毒开发出高亲和力的单克隆抗体,筛选到符合两种要求的抗体: 1.能够具有中和活性的抗体; 2.具有高度亲和力的配对抗体,同时因为各靶标序列之间具有高度的同源性,需要分别筛选到共同识别和单独识别的抗体。 实施需求: 1.免疫原准备 1.1 根据需求方要求,合成并克隆免疫原蛋白的编码序列,克隆并表达纯化免疫原蛋白,合计8个蛋白; 1.2 根据需求方要求,合成免疫原半抗原多肽,偶联到载体蛋白KLH上,合计11条多肽; 2.免疫并测试免疫效果 2.1 针对合成的19种免疫原,每个抗原免疫9只小鼠,使用不同的免疫佐剂,以期获得更丰富的抗体多样性; 2.2 检测免疫效价,效价达到100万以上,并测试血清在不同抗原之间的交叉反应性; 3. 细胞融合 3.1 使用SP20细胞进行细胞融合,每个融合筛选200个克隆以上; 3.2 每个融合获得至少8个阳性克隆细胞株; 3.3 对阳性细胞株进行亲和力排序; 4. 每个细胞株生产腹水 4.1 生产细胞株腹水,并对腹水抗体效价进行检测,并测试其在不同抗原之间的交叉反应; 4.2 根据需求方要求纯化抗体,抗体纯度需达到90%以上。 配置要求:1. 合计获得至少120个阳性克隆细胞株; 2. 每个阳性细胞株生产细胞株腹水,并进行效价的检测,并测试其交叉反应性,提供完整检测报告一份。
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