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DeepBio得分:5567.2
DeepBio得分
是基于文献引用次数，影响因子，文献新近度等因素计算的客观产品评级，得分越高表明该产品经过越可靠的实验验证，质量可信度越高
1) 细胞质检 RNA，用 Countess®II Automated Cell Counter 对细胞计数，将细胞浓度调整到理想浓度 1×10 6/mL。
2)10x 标记 cDNA 片段，含有 barcode 信息的凝胶珠子首先与细胞和酶的混合物结合，然后被位于 微流体"双十字"连接中的油表面活性剂液滴包裹。液滴非常小，仅能容纳一个凝胶珠子，液滴流 到储液器中被收集后，凝胶珠子溶解释放引物序列，逆转录 cDNA 片段，并以 cDNA 为模板进 行 PCR 扩增。将每个液滴中含有 barcode 信息的产物混合，构建测序文库。
3) 建库，首先利用 Biorupter 超声破碎仪将 cDNA 打断成 200~300bp 左右的片段，加上测序接头 P5和测序引物 R1 等传统二代测序的建库过程，最后进行 PCR 扩增得到 DNA 文库。
4) 簇生成和测序，利用 Qubit 仪器对文库进行定量，合格的文库被放置到 cBot 中进行桥式扩增， 生成簇后利用Novoseq进行测序。原理是每个循环都加入 A，T，G，C 4 种荧光 基团标记的 dNTP，依据 AT、GC 配对，对应的 dNTP 通过 DNA 聚合酶结合到模板 DNA 链 上，其他未结合的 dNTP 被洗脱掉，结合的位置释放出荧光信号，被计算机捕捉到并进行相应转 换，从而得到该位置的碱基信息。
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