Q-相对定量检测

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Q-相对定量检测

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货号：YK24070603

品牌：广州研科生物

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产品详情

QPCR（Real-time Quantitative PCR），即实时荧光定量聚合酶链式反应，是一种在PCR反应过程中加入荧光基团，通过实时监测荧光信号的变化来检测扩增产物并对其进行定量分析的技术。以下是QPCR检测的主要步骤：

一、实验前准备
试剂准备：准备好QPCR试剂盒、引物（目的基因、内参基因）、Nuclease Free Water、移液枪及枪头等。
设计引物和探针：根据目标序列设计特异性引物和荧光探针，确保引物和探针的特异性和效率。
二、样本处理
核酸提取：根据实验需要，提取目标DNA或RNA。对于RNA样本，还需进行反转录成cDNA的步骤。
反转录（RNA样本）：将RNA样本转录成相应的cDNA，以便进行后续的PCR扩增。
预处理：纯化提取的DNA/cDNA，去除污染物，确保模板的纯度。
三、反应体系准备
配制反应液：按照试剂盒说明书要求，配制包含引物、探针、模板、聚合酶、缓冲液等的反应体系。
点板：将配制好的反应液按照一定比例加入八联管或96孔板中，等待上机测试。
四、PCR扩增与荧光检测
设置反应条件：在热循环仪中设置适当的反应条件，包括变性温度、退火温度和延伸温度等。
执行PCR循环：将反应体系装入热循环仪，进行PCR循环。在PCR过程中，荧光基团会随着扩增产物的增加而发出荧光信号。
实时监测：通过荧光检测设备实时监测荧光信号的变化，记录每一轮扩增的荧光信号强度。
五、数据分析
结果判断：根据荧光信号的变化，分析Ct值（即达到预设荧光阈值所需的循环数），通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
绘制曲线：绘制溶解曲线和扩增曲线，用于判断扩增产物的特异性和扩增效率。
差异分析：使用Cq值（或其他相关指标）进行差异分析，比较不同样本或不同基因之间的表达差异。

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