当前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。 亚磷酰胺三酯法合成dna片段,具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的,合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的,相邻的核苷酸通过3'→5'磷酸二酯键连接。
溶液中的亚磷酰胺单体通过缩合反应形成3'- 5'磷酸酯键, 连接 到固相载体(CPG或树脂)上。 并依次延伸,直到序列的最后一个5'碱基连接上后合成结束。整个合成过程仪器自动完成,每个循环分为脱保护、活化、偶合、盖帽(封闭)、氧化五个步骤。
数据支持