样本前处理
迅速将新鲜组织转移至预冷的PBS或生理盐水中,去除脂肪、结缔组织或坏死部分,清洗3-5次至表面干净。
将组织剪成黄豆粒大小(约150-200 mg),置于冰上备用。
组织解离方法选择
机械法:适用于脾脏、淋巴结等疏松组织,通过网搓或研磨分离细胞
酶解法(常用):根据组织类型选择酶组合(如TrypLE™、胶原酶、DNase I等),结合37℃摇床孵育(120 rpm)促进消化。
消化过程控制
将组织块与酶解液混合后剪碎,每隔5-10分钟吹打混匀以提高解离效率。
观察组织块逐渐松散、溶液变浑浊时终止消化(通常20-40分钟)。
终止消化与过滤
加入含血清培养基(如DMEM+10% FBS)终止反应,4℃离心(300-400 g,5分钟)去上清。
用40-70 μm细胞筛过滤,移除未消化的大块组织或细胞团。
细胞纯化与质检
通过红细胞裂解液去除红细胞(必要时重复处理)。
重悬细胞后检测活性(台盼蓝染色)和浓度,确保活细胞率>85%。
好评度 | 商品满意度 | 服务满意度 | 发货满意度 |
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