基因递送-基因点突变载体构建

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基因递送-基因点突变载体构建

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货号：EDJ-FWVC10002

品牌：editx/艾迪基因

计量单位：份

交货周期

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选择规格：一套

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服务电话(移)：17319309550

DeepBio得分:5567.2

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产品详情

基因点突变载体构建

基于CRISPR/Cas9基因编辑技术和细胞同源重组修复机制，是目前实现基因点突变最常用的策略。通过gRNA的引导，将Cas9酶引导到目标位点，并通过产生DNA双链断裂，激活细胞的修复机制，通过同源末端连接修复机制，将目标突变引入。然而，这种策略有较多缺点，如编辑效率和纯合概率低，容易导致随机的插入或缺失突变等。

服务详情

交付标准：1.质粒图谱

2.质粒测序结果

3.质粒操作说明

4.质粒（pegRNA+sgRNA三组），辅助质粒（混合管）

周期/价格：在线咨询

详情描述

基于先导编辑PE (Prime Editing)技术，艾迪基因全新研发的Bingo™平台。该平台具备设计高效pegRNA和Nick sgRNA的算法，可获得高效的基因点突变载体。

Prime Editing的技术原理：利用一种融合了逆转录酶的Cas9 nickase（Cas9n-RT）和一种特殊的引导RNA——pegRNA，这种RNA不仅指导编辑酶到达目标DNA序列，还携带了需要插入或替换的遗传信息。在pegRNA的指导下，Cas9n-RT在目标DNA上产生一个单链切口，然后逆转录酶使用pegRNA作为模板合成新的DNA序列，从而实现精准的单碱基替换或小片段的插入和删除，而不需要双链DNA断裂，提高了编辑的精确性和安全性。

服务优势

质粒图谱

pegRNA质粒图谱

Nick sgRNA质粒图谱

参考文献

1. HEK293T细胞中实现CFTR基因的点突变

Prime editing functionally corrects cystic fibrosis-causing CFTR mutations in human organoids and airway epithelial cells

囊性纤维化（Cystic Fibrosis, CF）是一种由跨膜传导调节蛋白（CFTR）双等位基因功能丧失突变引起的常见的遗传性致命疾病。过去已有多种CFTR调节剂疗法获得批准，但这些高效调节剂（HEMTs）只适用于至少有一个F508del等位基因或其他响应性CFTR突变的患者，无法为许多（超）罕见的CFTR突变患者提供治疗方法。随着科学研究发展，人们发现基因治疗能为这些突变提供了新的治疗机会。特别是最近开发的基于CRISPR的系统——prime editing（PE），为治疗遗传性疾病开辟了新的时代。Prime editing能够在患者的染色体上原位“重写”和纠正突变，提供了治疗单基因疾病如CF的新机会。

在这篇文章中，研究人员利用CRISPR-Cas9技术设计了针对CFTR基因中L227R和N1303K两种突变的prime editing策略，并在HEK293T细胞中构建了稳定表达3HA-L227R-CFTR和3HA-N1303K-CFTR的细胞模型来评估prime editing的效果。在开发的DETECTOR机器学习算法保证效率和准确率的情况下，研究人员进一步进行基因和功能校正的评估，结果显示编辑效率最高可达25%，纠正后的CFTR蛋白在糖基化、定位和离子通道功能方面得到了显著恢复。这些结果也在原代细胞模型试验中得到验证。此外，利用全基因组评估分析，研究员们并未发现显著的脱靶编辑事件，证明了prime editing的高保真度，并且该研究的临床相关性与安全性评估也得到通过。总的来说，这项研究展示了prime editing技术在纠正CFTR基因突变和恢复CFTR蛋白功能方面的潜力，为囊性纤维化的治疗提供了新的思路和方法。

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