基因递送-基因敲入载体构建

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基因递送-基因敲入载体构建

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货号：EDJ-FWVC10003

品牌：editx/艾迪基因

计量单位：份

交货周期

：7

选择规格： 一份（三保一，可带cas9）

运杂费：登录后可查看运杂费

服务电话(移)：17319309550

DeepBio得分:5567.2

DeepBio得分是基于文献引用次数，影响因子，文献新近度等因素计算的客观产品评级，得分越高表明该产品经过越可靠的实验验证，质量可信度越高

产品详情

基因敲入载体构建

基因定点敲入（KI，gene knock in）是指外源DNA片段插入到指定的基因组位置，使该片段行使相应的功能。可以赋予细胞或生物体新的功能或恢复缺陷基因的正常功能，可用于研究基因功能与调控机制、构建疾病模型或开展基因治疗。

服务详情

服务类型：荧光蛋白定点敲入载体/标签蛋白定点敲入载体/特定DNA片段敲入的载体

交付标准：1.质粒图谱

2.质粒测序结果

3.质粒扩增操作说明

4.质粒（sgRNA-Cas9编辑质粒、Donor质粒）

周期/价格：在线咨询

详情描述

艾迪基因创新研发的高效基因敲入技术，采用了升级的CRISPR/Cas9系统，通过积攒十几年的基因编辑经验，总结出最优gRNA和Donor载体设计策略，具有更高的阳性率和更广的敲入位点选择性。可根据客户需求提供基因敲入载体构建服务。

服务优势

服务类型

可根据客户需求，综合基因等情况，进行基因敲入载体的设计与构建。

质粒图谱

pCRISPR Donor质粒图谱

pSpCas9质粒图谱

参考文献

1.在C57BL/6 J小鼠的Ins2启动子下游插入tdTomato

CRISPR/Cas9-mediated knockin of IRES-tdTomato at Ins2 locus reveals no RFP-positive cells in mouse islets

使用CRISPR/Cas9基因编辑技术，研究者构建了一种转基因小鼠模型，使其在胰腺β细胞中表达特定的荧光蛋白。在C57BL/6 J小鼠中，将tdTomato外源基因插入到Ins2启动子的下游。研究者设计了针对CRISPR/Cas9系统的Ins2特异性单导RNA靶向外显子2，同时构建了供体载体。然后，将Cas9、单导RNA和供体载体在体外显微注射到小鼠受精卵中，并将这些受精卵植入假孕小鼠体内。通过杂合子交配获得纯合子，并通过基因型鉴定、体内成像和冰冻切片验证了敲入效果。获得了六只F0小鼠和稳定遗传的Ins2-IRES-tdTomato F1。基因组测序结果显示，与对照组相比，敲入组的Ins2外显子没有变化，只有tdTomato的碱基序列被添加，没有发生碱基突变。然而，在体内成像和冰冻切片中未观察到红色荧光蛋白（RFP）的表达，敲入基因tdTomato的蛋白表达为阴性。结果表明，tdTomato蛋白的表达和荧光强度较低，未达到检测阈值。在CRISPR/Cas9技术中，IRES连接的外源片段会影响前基因的转录水平，从而导致下游基因的低水平表达，并影响基因插入的效果。

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