基因点突变细胞
人类有超过75000种疾病与遗传变异相关,其中大部分是单碱基突变。因此,构建基因点突变细胞株,在疾病的检测、研究与治疗中,具有巨大的应用潜力。例如点突变细胞株可用于神经疾病变性机制研究,小分子药物研发,肿瘤诊断与治疗,遗传性疾病诊断等。
点击查看相关服务:基因点突变载体构建
服务详情
服务类型 :模型构建/基因治疗方向的点突变效率验证
交付标准 :基因点突变单克隆细胞≥1株(2管细胞/株,1×10^6/管)
艾迪基因基于先导编辑PE (Prime Editing)技术全新研发的 Bingo™ 平台 ,可提供精准、高效的基因定点突变细胞定制服务。艾迪基因凝聚十多年基因编辑经验,在上千例基因编辑CRO项目经验中总结、优化、提升,成功率远超传统基因定点突变HDR系统。
Prime Editing的技术原理:利用一种融合了逆转录酶的Cas9 nickase(Cas9n-RT)和一种特殊的引导RNA——pegRNA,这种RNA不仅指导编辑酶到达目标DNA序列,还携带了需要插入或替换的遗传信息。在pegRNA的指导下,Cas9n-RT在目标DNA上产生一个单链切口,然后逆转录酶使用pegRNA作为模板合成新的DNA序列,从而实现精准的单碱基替换或小片段的插入和删除,而不需要双链DNA断裂,提高了编辑的精确性和安全性。
prime Editing的技术原理
服务优势
服务类型
可根据客户需求、综合基因等情况,为客户设计点突变方案。
1、 点突变细胞株模型构建
2、 基因提前引入终止密码子,实现基因敲除或产生截短蛋白
3、 基因治疗方向应用的pegRNA效率验证
4、 作为IVD用的生物来源标准DNA的原料
服务流程
数据案例
1.Bingo™ 7 的技术优势
艾迪基因对基于prime editing技术开发的Bingo™ 平台进行迭代升级,正式推出Bingo™ 7,具有更高的编辑效率。
1)相较于Bingo™ 5,成功率提高4.71倍
Bingo™ 7优化了PE蛋白系统,增加了与RNA结合的活性,从而了增加编辑效率。我们在多个编辑位点进行测试,相较于Bingo™ 5,成功率提高了1倍以上,最高可达4.71倍。这意味着更加高效、低成本地提供符合您实验需求的细胞模型。
与 Bingo™5 相比,Bingo™7 的编辑效率有所提高
备注: 1星<10%, 2星20%-30%,3星30%-40%, 4星50%-60%, 5星70%-100%
2)在挑战性位点实现有效的编辑
Bingo™ 7高效的编辑效率,使那些挑战性的位点有了编辑的可能。我们对多个难以编辑的位点,分别使用Bingo™ 7和Bingo™ 5系统进行测试,结果显示Bingo™ 7可以对这些位点实现有效的编辑。这意着以前难以编辑的任务变得可行,为突破性研究创造了可能。
Bingo™5 编辑失败 Bingo™7 编辑成功的位点
备注: 1星<10%, 2星 20%-30%, 3星 30%-40%,4星50%-60%,5星 70%-100%
2、成功案例---通过Prime Editors技术构建A基因点突变的Ishikawa细胞
艾迪基因根据客户需求,综合靶基因和细胞的情况,针对性地进行点突变方案设计。
1)点突变策略方案
A基因p.D200A位点位于第三号外显子,对应碱基信息为c.A599C。在圈红处设计pegRNA和Nick sgRNA。
2)多克隆编辑效率
在多克隆阶段,进行编辑效率检测,结果显示编辑效率约为60%。
3)单克隆测序验证
通过PCR及测序验证,确认单克隆已发生 c.A599C的编辑。
单克隆测序峰图