血浆与血清是从全血中分离出的一种十分复杂和多样化的基质,包含数百万种蛋白质和小分子多肽、盐、类脂、 氨基酸和糖等。血液蛋白参与机体免疫、 凝血-抗凝血、物质运输、营养和对生体信号调节等多种重要的生理功能。人体器官的病理变化可以直接导致血液蛋白在结构和数量上的改变, 这种特征性的变化对疾病诊断和疗效监测具有十分重要的意义。
低丰度富集是近年来发展起来的一种前处理方法,其主要原理是通过混合的纳米颗粒对低丰度蛋白进行亲和吸附形成“蛋白质冠”,后续经过洗涤就可以很好地去除高丰度蛋白。混合纳米材料表面修饰了不同配基,他们对不同的蛋白序列具有特定的亲和性,可以对多种低丰度蛋白质进行富集能有效解决蛋白信息丢失的情况。且这种前处理方法稳定性良好,同时也可回收高丰度去除方法中的绝大多数蛋白信息。
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<实验原理>
提取的低丰度蛋白酶解之后,利用液质联用技术对肽段进行质谱分析,通过比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。每条肽段的丰度(量)与其在质谱中的峰面积或信号强度成正比;而不同样品的同一条肽段在液相色谱上的保留时间(retention time,RT)是一致的,因此,可以通过对比谱图库中的信息,再整合到相应蛋白,实现对蛋白质在不同样本中的相对表达水平的定量分析。
1. 基于纳米颗粒特异性吸附样本中的中低丰度蛋白,更好的避免高丰度蛋白的影响;
2. 前处理操作过程较少,使样本更接近原始状态;
3. 通量高,不受样品个数的限制,可用于大规模样本数量检测;
4. 不依赖于抗体、无物种限制;
5. 4D-DIA全景式扫描,更稳定更可靠更精准;
<应用领域>
临床疾病标志物的筛选,作用机制研究,药物作用靶点研究,疾病的分子分型等。
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