数据非依赖采集(Data independent acquisition,DIA)是近年来备受瞩目的质谱采集技术之一,一度引领了定量蛋白质组学新发展。DIA相比于DDA的最大的优势在于高效测定复杂样品中相对低丰度蛋白,极大地提高了定量分析的可信度。其原理是在质谱数据采集时,高速、循环的将每个采集窗口内的所有母离子及其碎裂后的子离子进行全扫描,而非根据母离子信号强度筛选后进行二级碎片再扫描。因此DIA具有高通量、高分辨率、高可重现性、定量准确等优点,而且样本无需分级上机,极大的缩短了每个样品的检测时间,适合大样本量的蛋白质组研究。但由于DIA获得的是几乎没有任何丢失的所有离子信息,数据量及其复杂性大大增加,数据分析难度加大。目前主流的数据分析是基于 DDA/DIA 构建的谱库和实验产生的数据对样品中的蛋白质进行鉴定和定量。
<实验原理>
提取的蛋白酶解之后,利用液质联用技术对肽段进行质谱分析,通过比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。每条肽段的丰度(量)与其在质谱中的峰面积或信号强度成正比;而不同样品的同一条肽段在液相色谱上的保留时间(retention time,RT)是一致的,因此,可以通过对比谱图库中的信息,再整合到相应蛋白,实现对蛋白质在不同样本中的相对表达水平的定量分析。
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