首先将纯化后的蛋白质用消化酶(如胰酶)水解成肽段,肽段混合物经过除盐后首先进入液相色谱,实现初步分离,以降低样品复杂度。经液相色谱分离后的肽段先经过质谱的第一级--离子源(ESI,MALDI)使肽段离子化并形成分散的离子。接着选择部分强度较高的肽段母离子进入质谱的第二级系统(碎裂源)做进一步碎裂,使肽段离子被打碎成更小的、有规律的碎片离子。理论上蛋白质序列经过酶解后形成肽段,肽段再经过理论二级碎裂形成理论的二级碎片离子谱图。然后用实验产生的MS/MS谱图信息(主要包括质荷比、离子强度)与理论产生的MS/MS谱图信息比对,通过比较两者的相似度来确定谱图对应哪个肽段/蛋白。
「 技术流程
「 应用方向
疾病标志物筛选、分子机制研究、特殊功能蛋白质筛选、炎症与疾病、微量样本检测。
「 案例分享