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固相亚磷酰胺三酯法
引物合成的核心原理是固相亚磷酰胺三酯法,该方法通过化学偶联反应在固相载体上从3'端向5'端逐步延伸DNA链,具体步骤如下:
1. 脱保护(Detritylation)
· 固定在固相载体(如CPG或聚苯乙烯微珠)上的核苷酸,其5'-羟基被二甲氧基三苯甲基(DMT)保护。通过三氯乙酸(TCA)处理去除DMT,暴露出游离的5'-羟基,为下一步缩合反应做准备。
· 监控:脱下的DMT呈橙色,可通过颜色变化初步判断合成效率。
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