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固相亚磷酰胺三酯法
引物合成的核心原理是固相亚磷酰胺三酯法，该方法通过化学偶联反应在固相载体上从3'端向5'端逐步延伸DNA链，具体步骤如下：
1. 脱保护（Detritylation）
· 固定在固相载体（如CPG或聚苯乙烯微珠）上的核苷酸，其5'-羟基被二甲氧基三苯甲基（DMT）保护。通过三氯乙酸（TCA）处理去除DMT，暴露出游离的5'-羟基，为下一步缩合反应做准备。
· 监控：脱下的DMT呈橙色，可通过颜色变化初步判断合成效率。
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