1/适用范围：

适用于快速提取通用植物RNA。

2/试剂盒组成、储存、稳定性：

本试剂盒按照各成份指示储存12个月不影响使用效果。

3/储存事项：

1、常温成份不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

2、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

4/产品介绍：

独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，DNase直接在柱上消化残留DNA，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

5/产品特点：

1、完全不使用有毒的β-巯基乙醇/苯酚/氯仿，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2、简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。

3、配套DNase I 柱上消化，得到的RNA不残留DNase消化，可直接用于反转录 荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。

4、世界领先，是同类产品中适应性最广泛的试剂盒，可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄和一般多糖多酚植物。

5、多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达2.0～2.2，无DNA残留，可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。

6/注意事项

1、所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。

2、需要自备乙醇，研钵(可选)。

3、裂解液RPA和去蛋白液PRS中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

7/操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：第一次使用前请先在漂洗液RB瓶加入指定量无水乙醇!

1、直接研磨法（推荐）:

a. 新鲜植物组织称重后取100mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或液氮保存样品可直接称重后取100mg放入研钵），加1ml 裂解液RPA室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA立刻充分接触以抑制RNA酶活性。

b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13,000rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。

c. 取480μl裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

d. 立刻接操作步骤的步骤3。

2、液氮研磨法:

a. 取500μl裂解液RPA，转入1.5ml离心管中。

b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50mg细粉转入上述装有裂解液RPA的离心管, 立即用手剧烈振荡20秒，充分裂解。

c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。

d. 将裂解物13,000 rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。

e. 取裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

f. 立刻接操作步骤的步骤3。

注意：以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1ml的裂解液RPA和100mg的样品。

3、将混合物(每次小于720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱AC中，（吸附柱AC放入收集管CT中）13,000 rpm离心2分钟，弃掉废液。

确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

4、加350μl 去蛋白液PRS，室温放置1分钟，13,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

5、DNase I工作液配制：取45μlDNase I buffer和5μlRNase free DNase I在离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。

6、向吸附柱AC 中央加入50μl的DNase I 工作液，室温（20-30℃）放置15 分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。

7、向吸附柱AC 中加入350μl去蛋白液PRS， 12,000 rpm 离心30秒，弃废液，将吸附柱AC放回收集管CT中。

8、加入500μl漂洗液RB（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RB，重复一遍。

9、将吸附柱AC放回空收集管CT中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10、取出吸附柱AC，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。

11、如果预期RNA产量>30μg，加30-50μl RNase free water重复步骤10，合并两次洗液，或使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

注意：如果不需要做荧光定量PCR，仅仅做普通的反转录，克隆基因片段，可以省略DNA酶柱上消化的步骤，具体就是第4步骤的“加350μl 去蛋白液PRS”改成“加700μl 去蛋白液PRS”，同时省略步骤5，6，7。