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Standardized vial containing 2,000 Kunitz units of DNase I (D4527), vial of ≥0.25 mg total protein
NA.54
diagnostic assay manufacturingdiagnostic assay manufacturing
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
DNA酶I被用来产生DNA缺口,作为将带标记的碱基整合到DNA中的第一步。在MMTV-Wnt-1小鼠乳腺肿瘤肿瘤干细胞的分离和分子表征过程中,Sigma的DNAse I与其他酶一起被用于肿瘤的收集和分离。
由缩二脲测定的蛋白质。
DNase I是一种核酸内切酶,作用于嘧啶附近的磷酸二酯键,产生末端为5-磷酸的多核苷酸。在Mg²⁺存在时,DNAse I对每条DNA链进行独立的裂解,裂解位点是随机的。在Mn²⁺存在下,两条DNA链几乎在同一位点被裂解。发现其最佳pH值为7和8。二价阳离子,如Mn²⁺、Ca2+、Co²⁺和Zn²⁺是该酶的激活剂。浓度为5mM的Ca²⁺ 可以稳定酶的蛋白水解消化。牛胰腺DNA酶I由A、B、C、D四种色谱可分辨组分组成,摩尔比分别为4:1:1。仅发现少量的D。2-巯基乙醇、螯合剂、十二烷基硫酸钠(SDS) 和肌动蛋白 是已知的抑制该酶活性的物质。
该酶粉可在pH值为4.0-9.0的水中或任何缓冲液中进行复溶,磷酸盐缓冲液除外。应避免钙螯合剂的存在。在0.15 M NaCl中加入10 mg/mL DNAse I溶液,在 −20°C的温度下保存一周,其活性可能会降低10%。同样的溶液分装储存在2-8°C中,其活性可降低约20%。它在60°C下,pH值5到7之间可保持活性长达5小时,在68°C时在<10分钟内失去活性。在醋酸盐缓冲液(pH 5.0)和tris缓冲液(pH 7.2)中,当浓度为1mg/mL时,其活性以6%/小时的速度丧失。
一个Kunitz单位可以DNA、I型或III型作为底物,在25°C的pH 5.0条件下每分钟每毫升产生0.001的ΔA₂₆₀ 。
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