产品属性

中文名：LNP RNA Transfection Reagent (Primary Immune Cells)

英文名：LNP RNA Transfection Reagent (Primary Immune Cells)

纯度：BioReagent, 分子生物学级, 无菌

货号：L1375585-1.5ml

包装：1.5ml

存储温度：2-8°C储存,禁止冷冻

产品介绍：

LNP 原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒是基于脂质纳米粒（LNP）技术研发的专门针对原代免疫细胞的新型即用型转染试剂，利用 LNP 独特的跨膜转运和内体逃逸机制，实现对 RNA 高效递送，适用于不同类型 RNA 在原代免疫细胞的体外转染。

易用：无需特定包封设备，一步混合即可实现 RNA-LNP 瞬时包封，无需孵育。

高效：微量样品的包封率可达 80%以上，实现对原代免疫细胞高效转染。

安全：本品采用新型生物可降解脂质材料，细胞毒性极低，且经 0.2μm 微孔滤膜过滤。

产品组分表

运输与保存方法

受控常温(≤25℃)运输。2℃~8℃保存。不得冷冻！

适用范围

LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒适用于人或鼠原代免疫细胞的 RNA 转染，其中 RNA 类型包括siRNA、miRNA、gRNA 和 mRNA 等。

本产品仅供研究使用。

注意事项

（1）转染增强剂为冻干粉，开盖前请先离心，用 1×PBS 溶液制备成浓度 1μg/μL 的转染增强剂溶液，复溶后不得涡旋，根据使用需求进行分装，避免反复冻融。转染增强剂溶液-20℃可保存 3 个月， 2-8℃可储存 1 周。

如每孔转染增强剂用量较低，可在临用前将上述转染增强剂储存液用 1×PBS 溶液稀释至 0.1μg/μL，再加入细胞。

（2）RNA 原液的最佳溶剂为无酶水，且 mRNA 浓度不低于 200ng/μL、siRNA 浓度不低于 10μM，其他类型的溶剂对转染效果可能会有一定影响，具体情况可以联系我们。

（3）制备 RNA 预混液请确保使用试剂盒专用 Buffer 稀释 RNA 原液，不得使用 PBS 或培养基。

（4）请确保 RNA 预混液浓度为 40ng/μL。若多种 RNA 共转染，如 CRISPR Cas9 mRNA 与 gRNA 共转染，则 RNA 预混液浓度为 Cas9 mRNA + gRNA 的总浓度，Cas9 mRNA 与 gRNA 的推荐用量比为 1:1～1:2（μgmRNA:μggRNA）。

（5）RNA/LNP 的比例是 LNP 包封的关键因素，如需增减每孔用量，请按附录 A 和附录 B 项下注意事项进行调整。

（6）RNA-LNP 复合物在室温条件下可稳定存放 8 小时，请勿将 RNA-LNP 复合物置于冷冻条件。

（7）转染前后均无需更换细胞培养基，含有血清、双抗的完全培养基对转染效果无明显影响；转染 6h 以后可按细胞常规培养流程，进行换液或其他操作。

附录 A：原代免疫细胞 mRNA 转染操作说明

1. LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒操作流程

2. 不同培养容器中每孔试剂用量

3.注意事项

(1) 转染增强剂的使用见正文“5. 注意事项”。

(2) 请确保 mRNA 原液的溶剂为无酶水，且浓度不低于 200ng/μL。

(3) 不得使用 PBS 或培养基稀释 mRNA 原液，请确保稀释得到的 mRNA 预混液浓度为 40ng/μL。

(4) mRNA-LNP复合物在室温条件下可稳定存放 8 小时，请勿将 mRNA-LNP复合物置于冷冻条件。

(5) 请注意 mRNA/LNP 的比例是 LNP 包封的关键因素，如需增减每孔 mRNA 用量，您可以按比例增加或减少加入细胞的每孔 mRNA-LNP复合物和转染增强剂的用量。

附录 B：原代免疫细胞 siRNA 转染操作说明

1. LNP原代免疫细胞 RNA 转染试剂盒操作流程

2. 不同培养容器中每孔试剂用量

3. 注意事项

（1）转染增强剂的使用见正文“5. 注意事项”。

（2）请确保 siRNA 原液的溶剂为无酶水，且浓度不低于 10μM。

（3）不得使用 PBS 或培养基稀释 siRNA 原液，请确保稀释得到的 siRNA 预混液浓度为 3pmol/μL（即 3μM）。

（4）siRNA-LNP复合物在室温条件下可稳定存放 8 小时，请勿将 siRNA-LNP复合物置于冷冻条件。

（5）请根据 siRNA 用量调整 LNP转染试剂用量。以 96 孔为例，如每孔 siRNA 用量>3pmol，可按比例增加每孔 siRNA-LNP复合物的体积。例如：每孔需加入 6pmol siRNA，仅需取 4μL 上述 siRNA-LNP复合物，和 0.08μg 转染增强剂加入细胞即可。

如每孔 siRNA 用量<3pmol，转染试剂用量应维持在 1μL/孔，仅需对应调整 siRNA 预混液的浓度，其他操作维持不变。例如：每孔需加入 1.5pmol siRNA，仅需调整 siRNA 预混液浓度为 1.5μM 即可。

附录 C：人原代 T 细胞活化、扩增参考方案

注意事项

（1）原代 T 细胞培养也可使用有血清培养基。

（2）如使用 T 细胞激活剂活化人原代 T 细胞，具体活化方案请参考所用 T 细胞激活剂说明书。

（3）请尽量在细胞活化后一周内完成细胞转染实验。

（4）使用 24 孔板进行时，推荐的细胞密度为 2-5×105cells/孔。

（5）请确保转染前 CD25 表达水平不低于 80%，这对 RNA-LNP复合物成功递送到 T 细胞至关重要。

是否无菌：是

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