产品属性

中文名：Fluo™ Green dsDNA 定量检测试剂盒

英文名：Fluo™ Green dsDNA Assay Kit

货号：F766664-200T×10

包装：200T×10

存储温度：避光,-20°C储存,干燥

产品介绍：

在分子生物学的试验过程中， Fluo™ Green ® dsDNA  定量试剂盒是荧光检测双链  DNA  并进行定量  的一种产品，这种
方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中的：cDNA  文库的构建；用于亚克隆的    DNA  片段纯化及应用，比如进行  DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。  疫苗是现代疾病预防中常用的控制方式。如今许多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组 乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多数疫苗都采用细胞培养的方法生产。其中，疫苗的纯化是关键问题，我们需要尽可能的去除 宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。
常规的DNA含量的检测方法是在260nm（A260）处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信 号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5µg/mLdsDNA 溶液A260=0.1）。 Fluo™ Green 定量检测方法简单、方便，被多家生物制品厂所选择，成为生物制品残留DNA检测的标准。
目前该方法已纳入2010年版《中国药典》
原理: 
Fluo™ Green 与DNA双链结合后才发出的荧光，无DNA不发荧光；所发荧光与DNA浓度成正比。在2010年《中国药典》中提 出， Fluo™ Green 定量DNA的方法检出限约0.3ng/ml，DNA含量在1.25-80ng/mL范围时线性较好(R2>0.99).
优点：
1）该方法可以测定来源于任何表达宿主样品中的双链DNA。
2）可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
3）远远超出传统紫外A260的检测方法和Hoechst33258的灵敏度。
4）较高浓度的盐，尿素，乙醇，氯仿，去垢剂，蛋白或琼脂糖对测定无影响。
5）在等摩尔浓度  ssDNA  和  RNA  存在的条件下测定  dsDNA，其影响很小。
所需器材
• 微型荧光计；便携式荧光仪-上海互帼科学仪器有限公司HG-9型；1cm石英比色皿
• Fluo™ Green  dsDNA  定量检测试剂盒，  1mL  单位量的试剂浓缩液足够  2mL  体积的  200  次测定。
1×TE（10mM Tris 1mM EDTA）pH8.0；   250ug/mL 小牛胸腺DNA
实验方案
试剂制备
Fluo™ Green   dsDNA  定量试剂是以   1mL  的浓缩液形式保存在无水的  DMSO（二甲基亚砜）中。实  验当天，配制
2X Fluo™ Green   试剂的操作溶液，用  1xTE  按  1:200  的比例稀释浓缩液（10mM Tris-HCl，
1mM  EDTA，pH7.5）。如果要准备足够的操作溶液测定   20  个样品，可在   20mL1x  TE  中加入  100µL  Fluo™ Green  dsDNA 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。 Fluo™ Green 试剂 见光易降解，所以应将配 好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。
溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
实验方法：
1).  标准品工作液的配制：
小牛胸腺嘧啶DNA干粉1mg（Tris，Nacl等浓度已成标准体系），加入1mL双蒸水， 配制成1mg⁄mL的标准品工作液；
2).  染料工作液的配置：
6 uL Fluo™ Green 加入1mL TE(注意：用1×TE将 Fluo™ Green 稀释200倍，现用现配，注意避光)。
3).  标准品工作液稀释：
（1）母液稀释：取10ul（1mg⁄mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成10ug⁄mL，取10ul（10ug⁄mL） 标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成100ng⁄mL；
（2）倍比稀释：取800ul （100ng⁄mL）的标准品工作液加入到200ul TE溶液中，浓度达到80ng⁄mL（药典规定：荧
光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好，  该法DNA检出限为0.3 ng/ml），取500ul（80ng⁄mL）的标准品工 作液加入到 500ul  TE溶液中，浓度稀释到 40ng⁄mL；依次倍比稀释， 配成 20ng/ml、 10ng/ml、 5.0ng/ml、 2.5ng/ml、
1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液；
4).标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100ul混匀，避光室温放置5min。使用FB-15型 便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿 的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank，测定样品和空白对照的荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/ml）对应的
荧光强度作直线回归，制备标准曲线。

5).  测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA  浓度的标准曲线。

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