产品属性

中文名：Na⁺/K⁺-ATP酶活性检测试剂盒（钼酸铵, 微量法）

英文名：Na⁺/K⁺-ATPase Activity Assay Kit (AHM, Micro Method)

纯度：BioReagent

货号：N1505953-48T

包装：48T

存储温度：2-8°C储存,避光,-20°C储存

产品介绍：

ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞的生物膜酶系统中，具有载体和酶的功能，可以维 持细胞膜电位和调节渗透压，并为营养物质的吸收提供动力，对维持细胞正常生理功能起着极其重要的作用，并且可作为细胞能量代谢及功能有无损伤的重要评价指标。

检测原理：Na⁺/K⁺-ATP酶（Na⁺/K⁺-ATPase）能够分解ATP生成ADP和无机磷，无机磷在酸性条件下能够与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，经还原后生成蓝色磷钼蓝，产物在660nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可表征Na⁺/K⁺-ATP酶的活性。

适用样本：血清（浆）、动植物组织、细胞、细菌

注意：正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。 

自备仪器和试剂

酶标仪或可见光分光光度计（能测660nm处的吸光度） 

恒温箱

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

去离子水

匀浆器（如果是组织样本）

实验流程

1、试剂准备

注意：

(1) Reagent Ⅲ有刺激性气味，Reagent Ⅴ有毒，Reagent Ⅵ有腐蚀性，建议在通风橱进行实验。 

(2) 配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿避免磷污染。

2、样本制备

注意：

(1) 推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。处理好的样本须当天检测。 

(2) 如需测定蛋白浓度，推荐使用阿拉丁B665595 BCA蛋白定量试剂盒或R1491648 即用型BCA蛋白定量试剂盒。

2.1 血浆、血清等液体样本

可直接检测。 

2.2 动物组织样本

按0.1g组织加入1mL的Extraction Buffer的比例进行冰浴匀浆。匀浆液于4℃，8,000g离心10min。取上清，置于冰上待测。 

2.3 细菌和细胞样本

收集细菌或细胞到离心管内，4℃，12,000g离心1min弃上清；按照每5×10⁶个细菌或细胞加入1 mL Extraction Buffer，超声波破碎细菌或细胞（功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；4℃，8,000g离心10min，取上清，置冰上待测。 

2.4 植物样本

用冷的PBS冲洗植物样本去除表面的杂质。按0.1 g组织加入1 mL 的Extraction Buffer的比例进行冰浴匀浆。匀浆液于4℃，8,000g离心10min。取上清，置于冰上待测。 

3、实验步骤

3.1 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，可见分光光度计用去离子水调零。 

3.2 酶促反应（在EP管中加入下列试剂）

混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴锅准确反应10min；

混匀，4,000g，常温离心10min，取上清液。

3.3 定磷（96孔板或微量玻璃比色皿中加入下列试剂）

3.4 混匀，室温放置30min，在660nm处，记录各管吸光值。 

注意：每个样本均需要做对照孔，空白孔和标准孔各做1个即可。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果A_测定-A_对照大于0.3，样本可用Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

4、结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。 

4.1 血清（浆）等液体样本Na⁺/K⁺-ATPase活力的计算

定义：规定每小时每毫升血清（浆）中Na⁺/K⁺-ATPase分解ATP产生1 μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 

Na⁺/K⁺-ATPase活力 (U/mL)=C_标准×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白)×V_总÷V_样÷(T÷60)=7.5×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白) 

4.2 组织、细菌或细胞中Na⁺/K⁺-ATPase活力的计算

(1) 按蛋白浓度计算

定义：规定每小时每毫克组织蛋白中Na⁺/K⁺-ATPase分解ATP产生1 μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 

Na⁺/K⁺-ATPase活力 (U/mg)=C_标准×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白)×V_总÷(Cpr×V_样)÷(T÷60)=7.5×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白)÷Cpr 

(2) 按样本鲜重计算

定义：规定每小时每克组织中Na⁺/K⁺-ATPase分解ATP产生1 μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 

Na⁺/K⁺-ATPase活力 (U/g)=C_标准×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白)×V_总÷(V_样÷V_样总×W)÷(T÷60)=7.5×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白)÷W 

(3) 按细菌或细胞密度计算

定义：规定每小时每1万个细菌或细胞中Na⁺/K⁺-ATPase分解ATP产生1 μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 

Na⁺/K⁺-ATPase活力 (U/10⁴)=C_标准×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白)×V_总÷(V_样÷V_样总×500)÷(T÷60)=0.015×(A_测定-A_对照)÷(A_标准-A_空白) 

参数说明：

C_标准：标准管浓度，0.5 μmol/mL；

V_总：酶促反应总体积，0.25 mL；

V_样：加入样本体积，0.1 mL；

V_样总：加入Extraction Buffer体积，1 mL；

T：反应时间，10 min；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；

W：样本鲜重，g；

500：细菌或细胞总数，500万个。

注意事项

1、正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

2、如需测定蛋白浓度，推荐使用阿拉丁B665595 BCA蛋白定量试剂盒或R1491648 即用型BCA蛋白定量试剂盒。

3、生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等，为了您的安全和健康，请在实验全程做好生物安全防护， 穿戴实验服、口罩、手套、头套等安全护具，在通风橱、生物安全柜中进行实验。

4、本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

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