产品属性

中文名：谷氨酸脱氢酶 (GDH) 活性检测试剂盒（紫外微量法）

英文名：Glutamic Dehydrogenase (GDH) Activity Assay Kit (UV Micro Method)

纯度：BioReagent

货号：G1505936-96T

包装：96T

存储温度：2-8°C储存,避光

产品介绍：

谷氨酸（Glu）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸 之一，还可以通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。谷氨酸脱氢酶 （GDH）和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代 谢中起重要作用。 

检测原理：GDH催化NH₄⁺、NADH 和α-酮戊二酸，生成谷氨酸和 NAD⁺，引起340nm吸光度下降，通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。

注意：正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备仪器和试剂

1、酶标仪或紫外分光光度计（能测340nm处的吸光度） 

2、96孔UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头

3、制冰机、低温离心机

4、去离子水

5、匀浆器（如果是组织样本）

实验流程

1、试剂准备

2、样本制备

注意：

(1) 推荐使用新鲜样本。测定过程中，样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。 

(2) 如需测定蛋白浓度，推荐使用阿拉丁B665595 BCA蛋白定量试剂盒或R1491648 即用型BCA蛋白定量试剂盒。

2.1 组织

称取约0.1g样本，加入1mL Reagent Ⅰ，冰浴匀浆，8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。 

2.2 细胞（菌）

收集500万细胞（菌）到离心管内，用冷PBS清洗，离心后弃上清，加入1mL Reagent Ⅰ，冰浴超声波破碎5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。 

2.3 血清（浆）样本

直接检测。 

3、实验步骤

3.1 酶标仪或紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm。紫外分光光度计用去离子水调零。 

3.2 Working Solution于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）孵育30min。 

3.3 操作表（下述操作在96孔UV板或微量石英比色皿中操作）

3.4 迅速混匀后，于340nm检测，记录20s和5min 20s的吸光值，分别记为A₁和A₂，计算ΔA_测=A₁-A₂。 

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA_测小于0.005，可适当加大样本量。如果ΔA_测大于0.5，样本可用Reagent Ⅰ进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。因通过单位时间内吸光值的变化计算酶活，不推荐同时测多个样本。

4、结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

4.1 使用96孔UV板测定的计算公式 

(1) 血清（浆）GDH活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 

GDH (U/mL)=[ΔA_测×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷V_样本÷T=1286×ΔA_测 

(2) 组织中GDH活力的计算 

A. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 

GDH (U/mg prot)=[ΔA_测×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V_样本×Cpr)÷T=1286×ΔA_测÷Cpr 

B. 按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 

GDH (U/g 鲜重)=[ΔA_测×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W÷V_{Reagent Ⅰ}×V_样本)÷T=1286×ΔA_测÷W 

C. 按细胞（菌）密度计算 

单位的定义：每1万个细胞（菌）每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 

GDH (U/10⁴)=[ΔA_测×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V_样本÷V_{Reagent Ⅰ}×500)÷T=2.572×ΔA_测 

参数说明：

V_反总：反应体系总体积，0.2mL=2×10^-4L；

V_{Reagent Ⅰ}：加入Reagent Ⅰ体积，1mL；

V_样本：加入样本体积，0.02mL；

ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；

d：96孔UV板直径，0.5cm；

Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；

T：反应时间，5min；

W：样本质量，g；

500：细胞（菌）总数，500万；

10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。

4.2 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中的光径d: 0.5cm调整为d: 1cm进行计算即可。

注意事项

1、正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

2、本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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