产品属性

中文名：CCK-8试剂盒

英文名：Cell Counting Kit-8

纯度：BioReagent,for detection

货号：C266180-1ml

包装：1ml

存储温度：避光,-20°C储存

产品介绍：

  水溶性四唑（2-（2-甲氧基-4硝基苯）-3-(4-硝基苯)-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐），是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，被线粒体内的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的甲臜染料(formazan,下图)， 这种甲臜染料直接溶解在培养基中。水溶性四唑被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够。细胞增殖越多越快，则培养基的颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。正是利用这一特性开发的CCK-8试剂盒直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法应用非常广泛，可以用于生物活性因子的活性检测，抗肿瘤药物的筛选，细胞增值的测定，细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便，试剂盒包含一管已经配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液，即开即用，无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜，可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测，适合大规模高通量的样品检测。

CCK-8法与MTT比较：

  CCK8试剂盒提供了一种灵敏度高，操作简便，使用安全，重现性好的细胞增殖与活性检测方法。与传统的MTT相比无需有机溶剂和放射性同位素，步骤少，无损失，结果准确！本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作 。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。

1.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解；而本方法产生的甲臜是水溶性的，不仅省去了溶解的步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差。

2.与MTT方法相比，本方法线性范围更宽，灵敏度更高。本方法对细胞无毒性，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数多次测定从而找到最佳测定时间。

3.本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定，实验效果重复性好。

4.MTT具有毒性，同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解，会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒，使用中无需有机溶剂，操作更加安全。

5.本试剂盒在4℃避光可长期保存，使用无需配制，即开即用。

6.酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰（扣除空白孔即可）。

  CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

使用方法

1. 通常细胞增殖实验每孔加入100 μL 2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100 μL 5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10 μL 特定的药物刺激。

2. 每孔加入10 μL CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200微升，则需加入20 μL CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

3. 在细胞培养箱内继续孵育0.5 - 4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

4. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。

注意事项

1. 如果已开封，经常使用请将试剂存放在4ºC，并尽快用完。反复冻融会增加背景值，干扰实验测定。

2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。

4. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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