产品属性

中文名：新型磁珠法固定组织DNA提取试剂盒

英文名：NuClean Magbead FFPE DNA Kit

货号：N669954-96T

包装：96T

存储温度：室温

产品介绍：产品内容

产品简介

该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法。实验 过程中可采取无毒的脱蜡剂去除石蜡，降低实验过程中对实验者的危害。组织裂解后， DNA结合于硅基包被磁珠表面。漂洗后，高纯度的DNA洗脱于TE或去离子水中。经过 纯化的DNA可以直接用于PCR、 Real-time PCR、 SNP基因分型、STR基因分型、二 代测序和药物基因组学研究等。 DNA的得率、片段大小与样品类型、储存条件及储存时 间有很大关系。

自备试剂：

1. 全自动核酸提取仪

2.  96 DW PLate、 8 channel Comb

3.  3.  无水乙醇、异丙醇

实验前准备及重要注意事项

1.  获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为 宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存 放时间过久（＞1年）则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。

2.  确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制Proteinase K的作用。

3.  第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

4.  使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶 或者沉淀， 请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。

5.  如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2 μL DNase-Free的 RNase A（100 mg/mL），试剂盒中的RNase A如果长时间不用，建议-20℃保存。

6.  实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。

7.  Magbeads PN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads PN造成不可逆的损 害。 Magbeads PN每次使用时请充分振荡混合均匀。

操作步骤

一、石蜡包埋样本：

1.  用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10 µm的薄片。

2.  取约1×1cm²的切片（共约3-8片切片）置于离心管（自备）中，加入160 μL  Buffer DS，涡旋震荡10秒，再加入180 μL Buffer GTL和20 μL Proteinase K，涡旋震荡10 秒。 12000 rpm ，25℃ 离心1分钟。

注意：1 ) 如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2-3片弃掉不用。

2）DS低于18℃会凝固，如果凝固不影响下面的实验。

3.  56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。 90℃孵育1小时。样品室温静置30秒后25℃、 12000 rpm离心1分钟，用移液器沿管壁小心吸取下层水相（约180μL）于新离心管 中，尽量避免吸入蜡液和管底沉淀。

注意：1）56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵 育。

2）可选步骤：加入7 μL UNG（1 U/μL），50℃,5min ，不震荡。此步骤的目的是降低低频发生的 C>T | G>A转换（人为突变），同时有效保留真实发生的突变，从而使假阳性风险降至最低。

4.  可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向水相中加入2  μL 浓 度为100 mg/mL的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2 min。

5.  加入20 uL Proteinase K ，65℃, 450 rpm孵育15 min ，形成Lysate。

二、福尔马林等固定液中的样本：

1.  取约20mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500 μL 10mM PBS（PH 7.4）， 涡旋振荡， 12,000 rpm（～13,400×g）离心1分钟，弃上清，重复3次。

2.  上述管中加入180 μL Buffer GTL ， 20 μL Proteinase K，涡旋震荡混匀。

3.  56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。 90℃孵育1小时。样品室温静置30秒后25℃、 12000rpm离心1分钟，用移液器沿管壁小心吸取下层水相（约180μL）于新离心管 中，尽量避免吸入蜡液和管底沉淀。

注意：1）56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃ 孵育。

2）可选步骤：加入7 μL UNG（1U/μL），50℃, 5min  ，不震荡。此步骤的目的是 降低低频发生的 C>T | G>A  转换（人为突变），同时有效保留真实发生的突变，从 而使假阳性风险降至最低。

4.  可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向水相中加入2 μL浓 度为100 mg/mL的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2 min。

5.  加入20 uL Proteinase K ，65℃, 450 rpm孵育15 min ，形成Lysate。

手动操作步骤：

1.   向Lysate 中加入200 μL Buffer GL并涡旋震荡混匀。

2.   向离心管中加入300  μL异丙醇与20  μL磁珠后涡旋震荡混匀5秒钟，之后将离心管固

定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合10分钟。

3.  将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。

4.   向离心管中加入750 μL Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋震 荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。

5.  将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。

6.  重复步骤4-5。

7.   向离心管中加入750 μL Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋震 荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。

8.  将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。

9.  重复步骤7-8。

10. 离心管短暂离心后，将其重新固定于磁力架上用移液器去除管底溶液，之后开盖室 温放置5-10分钟使乙醇充分挥发。

11. 向离心管中加入50-200 μL Buffer TE后涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中，之后 将离心管固定于56℃、 1600 rpm的恒温混匀上震荡洗脱10分钟。

12. 将离心管固定于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存 备用。

与全自动核酸提取仪匹配

1.  按下表向96 DW深孔板中加入试剂：

注意：在1&7列中，可以先将Magbeads PN与异丙醇按表中比例混匀后再加入。

2.   将磁套与96 DW深孔板放入全自动核酸提取仪中，运行“FFPE DNA程序”。

3.   约30分钟后程序运行结束，将96DW深孔板和磁套从仪器中取出，把“6&12 Colume” 中的洗脱产物转移至离心管中-20℃保存备用。

附： FFPE DNA程序

查看阿拉丁官网此产品相关对应页面：https://www.aladdin-e.com/zh_cn/N669954.html

阿拉丁：推动发现，推进科学

在阿拉丁，我们将尖端科学与不懈的进步融合在一起。阿拉丁成立于2008年，以其卓越的试剂而闻名，从化学试剂、生化试剂、配体到蛋白质和抗体。我们拥有700多名员工，拥有多个生产工厂和研发中心，我们对卓越科学和产品质量的承诺坚定不移。（详细了解阿拉丁请点击: https://www.aladdin-e.com/zh_cn/about-aladdin）

化学创新的发源地：建筑面积28,000平方米的阿拉丁上海第一工厂。

阿拉丁生化进步的灯塔：阿拉丁第二工厂建筑面积36,000平方米，生产用于药物开发的必需砌块、生化试剂和配体。

阿拉丁美国运营中心：加强与国际市场的合作交流，推动阿拉丁在全球范围内的发展。

阿拉丁的研发中心：引领科技创新

阿拉丁在创新方面的投资，自2016年以来：阿拉丁建立了2个最先进的研发中心，以促进开创性研究和2个重点功能实验室。

（更多内容见: https://www.aladdin-e.com/zh_cn/rd_and_innovation）

化学研发中心（成立于2016年）投资：8000万元。重点：化学和药物化学领域的砌块、催化剂和配体。成就：独立合成了超过10000个构建块分子。

生物研发中心（成立于2021年）投资：1.2亿元。重点：蛋白质和抗体研发，采用哺乳动物瞬时表达和杂交瘤开发等平台。团队：由世界知名专家组成，包括免疫学家、化学家和生物化学家。

药物配体及靶点研发实验室（成立于2022年）投资：1500万人民币。重点：研究药物配体和靶标之间的相互作用，药物配体和化合物筛选工具开发，包括合成和表达更多配体的高通量自动化系统。

阿拉丁的品质承诺：建立试剂的黄金标准

在阿拉丁，质量不仅仅是一个基准——它是我们存在的本质。为什么质量对我们很重要：

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客户满意度：我们理解您对我们的信任，我们的使命是提供不仅满足而且提高您的标准的产品。

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阿拉丁的质量体系:国际认证

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阿拉丁蛋白和抗体生产中心：生物医学创新的未来

活性功能研究：在阿拉丁蛋白质表达实验室的范围内，先进的设备和专业知识汇聚在一起。在这里，我们经验丰富的科学家深入研究蛋白质表达和功能，开拓性突破并确保每次分析开发都体现生命科学领域精确性和可靠性的巅峰。

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精确解读蛋白质：在阿拉丁蛋白质印迹实验室的空间内，创新与专业知识相结合。我们的专家采用先进的技术和工具在分子水平上探测和分析蛋白质。这个空间证明了我们致力于理解蛋白质相互作用和表达，使我们处于生命科学研究和发现的前沿。 

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在阿拉丁，我们的电融合和电穿孔系统是创新和精度的证明。在这个高科技领域，我们利用受控电脉冲实现无缝细胞融合，并将外源DNA引入细胞中。我们致力于开发先进的方法，确保获得准确、可重复的结果，从而实现基因研究和细胞研究的突破。 

精密电穿孔：阿拉丁的电穿孔系统采用经过专业校准的电场，使细胞能够高效摄取DNA。这种先进的工具可确保可靠的遗传研究和变革性细胞研究。

阿拉丁的分子掌握：在我们的分子生物学实验室中深入了解基因和分子的复杂世界。利用尖端技术和工具，我们解读大自然最微小的蓝图，推动基因研究和生物技术创新的前沿发展。  

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细胞卓越：阿拉丁细胞库精心保护重要细胞系，确保其寿命和保存。它是持续研究和科学完整性的基石。 

精确可视化：阿拉丁的凝胶成像系统为研究人员提供了无与伦比的DNA和蛋白质可视化清晰度，提高了准确性并简化了分析。这是我们研究的清晰有效。

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运动效率：阿拉丁落地式离心机可快速、精确地分离样品，从而实现一致的结果和优化的工作流程。这些坚固的机器体现了我们致力于快速、准确地推进研究的奉献精神。

精度与效率：阿拉丁的酶标仪使我们的研究人员能够快速、准确地读数。该工具专为高通量分析而设计，对于在我们的研究中获得无与伦比的一致性结果至关重要。 

消毒中心：阿拉丁消毒室是我们清洁和安全的堡垒。它配备了先进的灭菌技术，可确保我们所有的工具和样品不受污染物的影响，维护我们对纯粹、不妥协的研究的承诺。

最佳生长环境：阿拉丁培养箱为培养和研究生物样本提供了理想的条件。通过精确的温度和气体控制，它们可以保证一致、可靠的结果，确保我们的研究在最好的环境中蓬勃发展。

紧凑高效：Aladdin 台式离心机以节省空间的设计提供快速、精确的样品分离。

精确清洗：Aladdin的微孔板清洗机可确保一致、彻底的板清洗，以获得最佳检测结果。

稳定运动：阿拉丁摇床可确保均匀混合，这对于一致的实验结果至关重要。 

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精确扩增：我们的系列PCR系统在扩增过程中提供无与伦比的一致性和准确性。这些仪器配备了最新的热循环技术，专为实现最佳DNA复制和分析而设计。它们证明了阿拉丁致力于精确可靠地推进分子生物学研究。 

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