产品属性

产品名称：5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶

规格或纯度：无动物源, 无载体, ActiBioPure™, 生物活性, EnzymoPure™, 无菌, 无DNA酶和RNA酶, 75 U/µL

产品介绍：

  本公司生产的 5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶，即 5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶，也称 Single-Strand Nucleic Acid 5' Adenylase 或单链核酸 5'端腺苷 酰化酶，可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA (pDNA or pRNA)转换生成 5'端腺苷酰化 DNA (AppDNA)或 5'端腺苷酰化 RNA (AppRNA)。 无论作为底物的 DNA 或 RNA 的 3'端是否进行了氨基化等封闭，使用本产品都可以高效催化产生 5'端腺苷酰化产物。在反应体系中不存在 ATP 的 条件下，本产品还可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA (pDNA)生成环状 DNA (circular DNA)。5' DNA/RNA Adenylase 进行 5'端腺苷酰化修饰反应 时，需要 ATP 和待腺苷酰化修饰的 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA。5' DNA/RNA Adenylase 催化单链核酸 5'端腺苷酰化反应的原理如下： 以 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA 为底物，本产品首先将 ATP 分解成 AMP 和 PPi，接着 AMP 转移到单链 DNA 或单链 RNA 的 5'磷酸基团上， 之后形成腺苷酰化单链 DNA 或单链 RNA，从而生成腺苷酰化产物。 

纯度（Purity）：不含 DNA 内切酶和外切酶，不含核糖核酸酶。

组分和说明

产品应用 

制备 5'端腺苷酰化的单链 DNA 接头，最终用于 miRNA 等 3'端为羟基的 RNA 或 3'端为羟基的单链 DNA 在克隆、高通量测序建库或 PCR 检测等时， 在 3'端添加的接头。 

产品优势 

本产品可以高效催化产生 5'端腺苷酰化产物。在反应体系中不存在 ATP 的条件下，本产品还可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA (pDNA)生成环状 DNA (circular DNA)。

使用说明 

1.解冻 5'端腺苷酰化修饰反应所需的各种试剂，将 5' DNA/RNA adenylase 置于冰上或冰盒内。 

2.参考下表在冰浴中配制如下反应体系：  

注 1：如果同时进行多个腺苷酰化反应，可以把上表中除 ssDNA 或 ssRNA 之外的所有溶液和酶提前预混合，然后再分装到各反应管内。 

注 2：如果涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染，相关试剂和耗材需要经过 DEPC 处理去除 RNase 或者确保是 RNase free 的。如果涉及单链 RNA，推荐适量添加 RNase Inhibitor。 

3.腺苷酰化反应：65℃孵育 1h。为了使连接反应更加充分，可以适当延长反应时间。 

4.终止反应：85℃孵育 5min 以终止反应。 

5.腺苷酰化产物的电泳鉴定：电泳上样前 95℃孵育 5min 随后置于冰浴，以充分变性。尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶(15%)进行凝胶电 泳分析。腺苷酰化修饰后分子量会变大一点。 

6.浓缩及后续用途：可以采用常规的乙醇沉淀方法进行浓缩，后续可以使用 T4 RNA Ligase2, truncated (200U/µl)等用于和小 RNA 等 的 3'羟基的连接反应。 

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输

 注意事项： 

（1）底物单链 DNA 或单链 RNA 的 5'端磷酸化是必须的，3'端可以进行氨基化等封闭，也可以不封闭；不进行 3'端氨基化等封闭时，建议将 ATP 的浓度增加至 0.5mM，可以避免底物发生环化或串联反应。 

（2）5' DNA/RNA adenylase 不能连接双链 DNA (dsDNA)之间的缺刻。5' DNA/RNA adenylase 的最佳反应温度为 65℃，并且在 25℃时会出现 去腺苷酰化现象，因此反应完成后推荐在 85℃孵育 5min 以失活 5' DNA/RNA adenylase。如果没有充分失活 5' DNA/RNA adenylase，后续经 历室温温度条件时，会导致腺苷酰化比例下降。 

（3）5' DNA/RNA adenylase 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。 

（4）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

（5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

生物活性：One unit is the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1pmol of AMP to pDNA substrate in a total reaction volume of 20μl in 15 minutes at 65℃.

无载体：Yes

无动物源：Yes

Accession #：8UCH_A,A0A075LQ94

级别：无动物源, 无载体, 生物活性, 无DNA酶和RNA酶, ActiBioPure™, EnzymoPure™, 无菌

储存缓冲液：10 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5

浓度：75 U/µL

储存温度：-20°C储存,避免反复冻融

运输条件：超低温运输

稳定性与储存：长期储存-20℃（24个月）；避免反复冻融。

单位定义：One unit is the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1pmol of AMP to pDNA substrate in a total reaction volume of 20μl in 15 minutes at 65℃.

Accession #：8UCH_A,A0A075LQ94

生物活性：One unit is the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1pmol of AMP to pDNA substrate in a total reaction volume of 20μl in 15 minutes at 65℃.

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