产品属性

中文名：E.coli DNA Polymerase I

英文名：E.coli DNA Polymerase I

纯度：不含除E.coli DNA Polymerase I之外的其它种类的DNA外切酶，不含内切酶，不含RNase。

货号：E745501-5000U

包装：5000U

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

产品介绍：

阿拉丁生产的E.coli'DNA Polymerase I，即大肠杆菌DNA聚合酶I，是由阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种DNA模板依赖的DNA聚合酶，可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下，催化5'→3'方向的DNA合成1]。"E.coli'DNA Polymerase I同时还具备双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性、单链特异性的3'→5'外切酶活性以及核糖核酸酶H活性2]。"E.coli'DNA Polymerase I的DNA合成酶活性和双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性，可以实现缺刻处3'-OH起始的DNA合成和5'端单链DNA的降解，实现缺口平移。"E.coli'DNA Polymerase I的单链特异性的3'→5'外切酶活性可以起到DNA合成的校验作用(proofreading)。在有dNTP存在的情况下，"E.coli DNA Polymerase I更多地表现为DNA聚合酶活性；而当dNTP不存在的情况下，E.coli'DNA Polymerase I更多表现为单链特异性的外切酶活性，例如可以表现为平末端双链DNA中的任一条链的5'端的5'→3'外切酶活性。E.coli DNA Polymerase I的多功能性可实现以双链DNA中的缺刻或缺口为起点合成新的DNA链；从缺口处降解与模板链互补的DNA链，实现DNA的缺口平移；保证DNA复制过程中错配的校对，并对复制和修复中出现的空隙进行填补3]。阿拉丁生产的E.coli'DNA Polymerase I补平双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的效果参考图1。图1. 阿拉丁生产的E.coli DNA Polymerase I 补平双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的"E.coli DNA Polymerase I，37ºC孵育20分钟进行反应，反应完成后75ºC孵育20分钟以终止反应。取出5μl反应产物，加入1μl 6X DNA Loading Buffer ，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。180V电泳60分钟，之后用Gel-Red (EB升级换代产品，10000X) 室温染色5分钟，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20µl): 10mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, 100µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 5' overhang (pH7.9 @ 25ºC)。dsDNA with 5' overhang (也称具有5'突出末端的双链线性DNA)是使用Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) ("D0251', ")并按照该产品说明书推荐的程序，把5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'这两条寡核苷酸链进行退火反应得到的产物，并以此退火产物为底物，进行双链DNA 5'突出末端的补平。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。阿拉丁生产的E.coli'DNA Polymerase I对3'端带有氨基修饰的双链线性DNA消化(5'→3'外切酶活性)的效果参考图2。图2. 阿拉丁生产的E.coli DNA Polymerase I 对3'端带有氨基修饰的双链线性DNA消化(5'→3'外切酶活性)的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的"E.coli DNA Polymerase I，37ºC孵育20分钟进行反应，反应完成后75ºC孵育20分钟以终止反应。取出5μl反应产物，加入1μl 6X DNA Loading Buffer ，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。180V电泳60分钟，之后用Gel-Red (EB升级换代产品，10000X) 室温染色5分钟，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μl)：10mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, 0.5µM dsDNA。3'端带有氨基修饰的单链DNA不会被"E.coli'DNA Polymerase I 的3'→5'外切酶活性所降解。3'端带有氨基修饰的dsDNA是使用Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) ("D0251', ")并按照该产品说明书推荐的程序，把5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'NH2和5'-GTAAAACGACGGCCAGTCTATGTATCTATGTAT-3'NH2这两条寡核苷酸链进行退火反应得到的产物，并以此退火产物为底物，进行双链线性DNA消化。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

用途：

DNA合成；双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的补平；双链DNA 3'突出末端(3' overhang)的削平；cDNA第二条链合成[4]；与DNase I一起使用，进行DNA切口平移；DNA的切口翻译以获得具有高比活性的探针。

来源：

纯化自携带编码E.coli DNA Polymerase I基因的E.coli重组菌株。

酶储存溶液：

25mM Tris-HCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol (pH7.4 @25ºC)。10X Reaction Buffer: 100mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT (pH7.9 @25ºC)。

失活或抑制：

75ºC孵育20分钟可使E.coli DNA Polymerase I失活。

注意事项：

由于E.coli DNA Polymerase I具有外切酶活性，在进行反应前应尽量避免环境温度偏高导致的DNA链被切除。E.coli DNA Polymerase I不具有内切酶活性，且本产品不包含DNase I，进行切口翻译反应时必须另外添加DNase I。对E.coli DNA Polymerase I剧烈震荡或搅拌会使酶失活。E.coli DNA Polymerase I与DNA的亲和力较高，加入过量的酶易发生凝集作用，影响反应的进行。E.coli DNA Polymerase I可使用带修饰的核苷酸(例如生物素、地高辛、荧光标记核苷酸)作为DNA合成的底物，以用于DNA探针的标记。酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的补平：a.对于双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的补平，参考下表在冰浴中配制反应体系(以20μl体系为例)。 Reagent Volume Final Concentration Nuclease-Free Water (16-x)μl - dsDNA with 5' overhang xμl ~0.5µM or 5-200ng/µl 10X Reaction Buffer 2μl 1X dNTP Mix (2mM each) 1μl 100μM E.coli DNA Polymerase I (10U/µl) 1μl 0.5U/µl Total Volume 20μl - 注1：在进行末端补平实验时可适当减少酶量，避免在外切酶活性的作用下导致模板的缺失。注2：如果同时进行多个反应，可以把上表中除dsDNA with 5' overhang之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入dsDNA with 5' overhang。注3：dsDNA with 5' overhang如果是寡核苷酸，最终浓度可以约为0.5µM；如果是消化后的DNA质粒等最终浓度可以约为5-200ng/μl。b.按上表设置好反应体系后，适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。c.反应条件：37ºC孵育20分钟。注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。d.终止反应：75ºC孵育20分钟使E.coli DNA Polymerase I失去活性。2.双链线性DNA的消化：a. 对于双链线性DNA消化，参考下表在冰浴中配制如下反应体系(以20μl体系为例)。 Reagent Volume Final Concentration Nuclease-Free Water (17-x)μl - dsDNA xμl ~0.5µM or 5-200ng/µl 10X Reaction Buffer 2μl 1X E.coli DNA Polymerase I (10U/µl) 1μl 0.5U/µl Total Volume 20μl - 注：如果同时进行多个反应，可以把上表中除dsDNA之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入dsDNA。b. 按上表设置好反应体系后，适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。c. 反应条件：37ºC孵育20分钟。注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。d. 终止反应：75ºC孵育20分钟使E.coli DNA Polymerase I失去活性。3.其它用途可以参考适当的文献资料进行。常见问题：1.E.coli DNA Polymerase I能补平3'突出末端吗？不能，E.coli DNA Polymerase I只能通过移除3'突出末端的方式形成平末端。E.coli DNA Polymerase I 、Klenow Fragment 、T4 DNA Polymerase是削平3'突出末端的最佳选择。2.E.coli DNA Polymerase I能补平DNA的5'突出末端吗？可以，5'突出末端会被补平，3'突出末端会被削平。Klenow Fragment 缺乏5'→3'外切酶活性，是补平DNA的5'突出末端的首选酶。3.E.coli DNA Polymerase I能用于切口平移实验吗？能，切口平移实验是该酶的重要应用之一。4.切口平移实验时有温度要求吗？切口平移时的孵育温度应低于20ºC。在较高的温度下，新合成的链可以分离并被复制。5.E.coli DNA Polymerase I可以热失活吗？可以。反应结束后添加10mM EDTA螯合Mg2+，当温度升高时，可以保护DNA末端，然后在75ºC加热20分钟即可将酶灭活。6.E.coli DNA Polymerase I能移除5'突出末端吗？ 不能，E.coli DNA Polymerase I的5'→3'外切酶活性仅适用于双链DNA缺刻处。7.DNA切口平移能够用来做标记探针吗？可以，DNA聚合酶I用5'→3'核酸外切酶去除缺口处的前导碱基，并用标记的碱基填充。该方法适于制作大而均匀的探针，但比活性不高。参考文献：1.Kunkel TA, Loeb LA, Goodman MF. J Biol Chem. 1984. 259(3):1539-45.2.Green MR, Sambrook J. Cold Spring Harb Protoc. 2020. 2020(5):100743.3.Yu H, Chao J, Patek D, Mujumdar R, Mujumdar S, Waggoner AS. Nucleic Acids Res. 1994. 22(15):3226-32.4.D'Alessio JM, Gerard GF.Nucleic Acids Res. 1988. 16(5):1999-2014.

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阿拉丁：推动发现，推进科学

在阿拉丁，我们将尖端科学与不懈的进步融合在一起。阿拉丁成立于2008年，以其卓越的试剂而闻名，从化学试剂、生化试剂、配体到蛋白质和抗体。我们拥有700多名员工，拥有多个生产工厂和研发中心，我们对卓越科学和产品质量的承诺坚定不移。（详细了解阿拉丁请点击: https://www.aladdin-e.com/zh_cn/about-aladdin）

化学创新的发源地：建筑面积28,000平方米的阿拉丁上海第一工厂。

阿拉丁生化进步的灯塔：阿拉丁第二工厂建筑面积36,000平方米，生产用于药物开发的必需砌块、生化试剂和配体。

阿拉丁美国运营中心：加强与国际市场的合作交流，推动阿拉丁在全球范围内的发展。

阿拉丁的研发中心：引领科技创新

阿拉丁在创新方面的投资，自2016年以来：阿拉丁建立了2个最先进的研发中心，以促进开创性研究和2个重点功能实验室。

（更多内容见: https://www.aladdin-e.com/zh_cn/rd_and_innovation）

化学研发中心（成立于2016年）投资：8000万元。重点：化学和药物化学领域的砌块、催化剂和配体。成就：独立合成了超过10000个构建块分子。

生物研发中心（成立于2021年）投资：1.2亿元。重点：蛋白质和抗体研发，采用哺乳动物瞬时表达和杂交瘤开发等平台。团队：由世界知名专家组成，包括免疫学家、化学家和生物化学家。

药物配体及靶点研发实验室（成立于2022年）投资：1500万人民币。重点：研究药物配体和靶标之间的相互作用，药物配体和化合物筛选工具开发，包括合成和表达更多配体的高通量自动化系统。

 

阿拉丁的品质承诺：建立试剂的黄金标准

在阿拉丁，质量不仅仅是一个基准——它是我们存在的本质。为什么质量对我们很重要：

产品卓越：我们坚定不移的奉献精神确保每件产品都发挥最佳性能，始终超出预期。

客户满意度：我们理解您对我们的信任，我们的使命是提供不仅满足而且提高您的标准的产品。

遵守监管：我们精心调整我们的流程和产品，使其符合严格的监管要求和标准，保证您的产品具有最高的完整性。

选择阿拉丁，您就选择了品质传承。浏览我们确保QC质量品质的世界级仪器：

深入研究分子细节：见证阿拉丁的400MHz核磁共振(NMR)波谱仪的力量揭示化合物错综复杂的结构细微差别。

提高研究精度：阿拉丁近千万元级仪器600MHz核磁共振波谱仪(NMR) 

微观放大：阿拉丁最先进的日立场发射扫描电子显微镜(SEM)使研究人员能够在超结构水平上对固体物质的复杂形态和成分提供无与伦比的见解。

深入研究分子复杂性：阿拉丁的技术专家凭借精准度和专业知识，使用WATERS液相色谱-质谱仪(UPLC-MS)，熟练地分离和破译复杂的有机混合物。

阿拉丁的质量体系:国际认证

我们对科学界的承诺不仅仅有言语上的支持。在阿拉丁，我们致力于提供无与伦比的产品和服务，并通过国际认可的认证得到加强：

·ISO 9001:2015认证 ——证明我们的质量管理体系。

·ISO 17025:2017认证 ——反映了我们在实验室运营方面的卓越表现。

·CNAS认证 ——肯定了我们实验室的管理体系、设备、人员素质、测试方法和技术能力。

·ISO 13485认证 ——这是对我们在生物产品如活性蛋白和抗体方面膜生产能力的认可。

阿拉丁蛋白和抗体生产中心：生物医学创新的未来

活性功能研究：在阿拉丁蛋白质表达实验室的范围内，先进的设备和专业知识汇聚在一起。在这里，我们经验丰富的科学家深入研究蛋白质表达和功能，开拓性突破并确保每次分析开发都体现生命科学领域精确性和可靠性的巅峰。

纯度和精确度的巅峰：阿拉丁的蛋白质纯化实验室是科学严谨和进步的灯塔。在这里，我们的专业人员利用尖端工具来分离和研究最纯净形式的蛋白质，确保我们的研究和成果始终满足生命科学领域清晰度和准确性的最高标准。利用精确的本质：阿拉丁的蛋白质纯化仪是现代生物技术创新的缩影。这种最先进的设备经过精心校准，能够以无与伦比的精度纯化蛋白质，确保我们的研究在广阔的生命科学领域保持在精度和可靠性的前沿。

精确解读蛋白质：在阿拉丁蛋白质印迹实验室的空间内，创新与专业知识相结合。我们的专家采用先进的技术和工具在分子水平上探测和分析蛋白质。这个空间证明了我们致力于理解蛋白质相互作用和表达，使我们处于生命科学研究和发现的前沿。 

卓越保存：在阿拉丁最先进的冻干机中，我们强调冷冻干燥的完美性。我们的设备可保护生物样品的内在特性，以实现长期储存，突显了我们对研究诚信的奉献精神。

阿拉丁的蛋白质冻干实验室：在这里，我们将先进的冷冻干燥技术与深厚的专业知识相结合。我们的任务-确保蛋白质长时间保留其天然结构和功能，支持突破性的研究和应用。

在阿拉丁，我们的电融合和电穿孔系统是创新和精度的证明。在这个高科技领域，我们利用受控电脉冲实现无缝细胞融合，并将外源DNA引入细胞中。我们致力于开发先进的方法，确保获得准确、可重复的结果，从而实现基因研究和细胞研究的突破。 

精密电穿孔：阿拉丁的电穿孔系统采用经过专业校准的电场，使细胞能够高效摄取DNA。这种先进的工具可确保可靠的遗传研究和变革性细胞研究。

阿拉丁的分子掌握：在我们的分子生物学实验室中深入了解基因和分子的复杂世界。利用尖端技术和工具，我们解读大自然最微小的蓝图，推动基因研究和生物技术创新的前沿发展。  

捕捉看不见的事物：阿拉丁的激光共聚焦扫描显微镜(CLSM) 提供无与伦比的清晰度和深度的成像。借助精确的激光聚焦，我们的CLSM深入微观领域，揭示复杂的细节并解开细胞景观的秘密。

阿拉丁的流式洞察：走进我们的流式细胞术实验室，在这里细胞复杂性与高级分析相结合。在这里，单个细胞流动、被照亮并揭示其独特的特征，使我们能够获得精确的数据和深入的生物学理解。 

揭示细胞动力学：在阿拉丁细胞功能实验室，我们深入研究复杂的细胞世界，探索它们的行为、相互作用和在更大系统中的作用。我们的团队利用最先进的设备，深入研究细胞功能的奥秘，为突破性的发现铺平道路。

细胞水平的联合：在阿拉丁细胞融合实验室的空间内，我们探索细胞组合的迷人领域。我们的专业团队利用尖端技术，研究融合细胞的机制、应用和潜力，加深我们的理解并实现新颖的生物医学创新。 

精密筛选中心：在阿拉丁筛选实验室，我们专注于单克隆和杂交瘤细胞的细致筛选。我们的团队将专业知识与先进方法相结合，确保分离出优质细胞系，从而推动后续研究和应用的卓越发展。探索奉献精神与尖端技术的交叉点，以实现细胞的完美。

细胞卓越：阿拉丁细胞库精心保护重要细胞系，确保其寿命和保存。它是持续研究和科学完整性的基石。 

精确可视化：阿拉丁的凝胶成像系统为研究人员提供了无与伦比的DNA和蛋白质可视化清晰度，提高了准确性并简化了分析。这是我们研究的清晰有效。

多功能性：阿拉丁综合实验室是各种研究活动的结合体，配备了最先进的工具。在这里，我们进行广泛的科学探索，确保每项研究都以精确性和可靠性为基础。 

运动效率：阿拉丁落地式离心机可快速、精确地分离样品，从而实现一致的结果和优化的工作流程。这些坚固的机器体现了我们致力于快速、准确地推进研究的奉献精神。

精度与效率：阿拉丁的酶标仪使我们的研究人员能够快速、准确地读数。该工具专为高通量分析而设计，对于在我们的研究中获得无与伦比的一致性结果至关重要。 

消毒中心：阿拉丁消毒室是我们清洁和安全的堡垒。它配备了先进的灭菌技术，可确保我们所有的工具和样品不受污染物的影响，维护我们对纯粹、不妥协的研究的承诺。

最佳生长环境：阿拉丁培养箱为培养和研究生物样本提供了理想的条件。通过精确的温度和气体控制，它们可以保证一致、可靠的结果，确保我们的研究在最好的环境中蓬勃发展。

紧凑高效：Aladdin 台式离心机以节省空间的设计提供快速、精确的样品分离。

精确清洗：Aladdin的微孔板清洗机可确保一致、彻底的板清洗，以获得最佳检测结果。

稳定运动：阿拉丁摇床可确保均匀混合，这对于一致的实验结果至关重要。 

每个液滴的精确度：Aladdin的微滴式数字PCR(ddPCR) 提升了分子分析的标准，可对目标DNA进行超灵敏和绝对定量。我们的ddPCR利用液滴分配的力量，确保高精度检测和卓越的重现性，将研究准确性提升到新的高度。

精确扩增：我们的系列PCR系统在扩增过程中提供无与伦比的一致性和准确性。这些仪器配备了最新的热循环技术，专为实现最佳DNA复制和分析而设计。它们证明了阿拉丁致力于精确可靠地推进分子生物学研究。 

重新定义卓越的细胞分选：阿拉丁的 BD FACSymphony?S6细胞分选仪代表了先进流式细胞术的巅峰。这款最先进的仪器具有无与伦比的准确性和广泛的多参数检测能力，简化了细胞分选过程并确保最大程度的样品完整性，是继 阿拉丁的600MHz核磁共振波谱仪（NMR）后购置的另一台近千万元级仪器，可配置多达50个参数，它非常适合复杂的研究应用，重申了我们对尖端科学的承诺。