产品属性

中文名：EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase

英文名：EnzymoPure™Extra-long DNA Polymerase

纯度：EnzymoPure™, 不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

货号：E745687-1000U

包装：1000U

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

产品介绍：

阿拉丁生产的EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase，是一种通过基因重组改造而获得的具有超强(4kb/min)、超长(35kb)扩增能力的高度热稳定的DNA聚合酶，具有扩增速度极快，保真度极高，短时间内即可轻松实现35kb λDNA片段扩增等突出优点(参考图1)。推荐用于5kb甚至30kb以上长片段的PCR扩增。EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase使用单体酶完成超长片段扩增。同类产品如NEB的Taq DNA Polymerase、Thermo的Scientific Extensor Long Range PCR Enzyme Mix、Promega的 Long PCR Master Mix等进行超长片段扩增大多采用双酶体系，即结合具有强扩增能力的DNA聚合酶和具有校对功能的DNA聚合酶来实现保真性高的长片段扩增，而EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase和Thermo的GeneAmp XL PCR Kit中使用的rTth DNA Polymerase XL (Extra Long)类似，不需要任何其它酶或者蛋白、多肽等辅助因子，即可突破单体酶一步完成长片段的扩增。EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase扩增速度极快。扩增小于6kb的DNA片段时，延伸每1kb只需要15秒；扩增大于6kb的DNA片段时，延伸每1kb也只需要30秒。EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase由于其超快的扩增速度，因而可以大大缩短超长片段每个PCR循环的扩增时间。本产品也同样适用于短片段的扩增，可以实现超快速的PCR扩增。EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶。它不仅可以非常高效地催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合反应，它同时还具有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity)，它的错误发生概率比Taq酶要低100倍，比pfu酶还要低约9倍。它可以轻松胜任具有复杂二级结构的、非常长的DNA片段的准确扩增，因此它是目的基因扩增和克隆的理想选择。 图1. EnzymoPure™ Extra-long DNA polymerase以λDNA为模板，PCR扩增不同长度片段(5-35kb)的电泳图。电泳采用0.8%琼脂糖凝胶，1XTAE，100V电泳180分钟。EnzymoPure™ Extra-long DNA Polymerase的主要性能与Taq酶及同类产品的比较请参考下表。

用途：

超长DNA片段的准确高效PCR扩增、常规高保真PCR、点突变、克隆用途的PCR扩增等。Extra-long DNA polymerase扩增出来的DNA片段为双平端，可以直接用于双平端克隆，但不能直接用于常规的T载体克隆。如需用于T载体克隆，推荐选购 Plus DNA polymerase。

来源：

Extra-long DNA Polymerase通过大肠杆菌重组、表达、纯化而获得。

酶储存溶液：

20mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 200μg/ml BSA and 50% (v/v) glycerol。

失活或抑制：

酚抽提可以使Extra-long DNA polymerase失活。

注意事项：

PCR反应非常灵敏，在使用Extra-long DNA Polymerase进行PCR扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量设置不加模板的空白对照。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.PCR反应体系的设置：a.溶解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将 Extra-long DNA polymerase置于冰浴上或冰盒内。b.参考下表在冰浴上设置PCR反应(如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和 Extra-long DNA polymerase的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中可以包括引物)：扩增片段小于6kb 扩增片段大于6kb 试剂 最终浓度 体积 最终浓度 体积 双蒸水或MilliQ水-(36.5-x)μl-(42-x-y)μl10X Buffer1×5μl1×5μldNTP (2.5mM each)0.25mM5μl0.5-0.75mMxμl模板DNA10pg-1μg*xμl100-150ng*yμl引物混合物(10μM each)0.2μM each1μl0.4μM each2μl Extra-long DNA polymerase2.5U/50μl1μl2.5U/50μl1μl总体积 -50μl -50μl *对于不同类型模板DNA的推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA 100ng-500ng；大肠杆菌基因组DNA 100pg-100ng；质粒DNA 1ng-20ng。扩增大于25kb的片段时，模板量宜适当加大，但过多的模板DNA也容易导致非特异性的PCR产物。c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果用的PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油)以防止蒸发。e.各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。2.PCR反应参数的设置可以参考如下表格： 步骤 循环数 温度 扩增片段小于6kb 扩增片段6-25kb 扩增片段大于25kb 说明 1192℃3min3min3min最初变性225~3592℃30sec30sec30sec变性55℃30sec30sec退火68℃15sec/kb0.5min/kb0.5min/kb*延伸3168℃10min15min15min延伸、补全414℃foreverforeverforever临时存放说明：上面表格中15sec/kb表示，如果扩增片段是4kb，那么68℃的延伸时间为1分钟。0.5min/kb表示如果扩增片段是4kb，那么68℃的延伸时间为2分钟。*对于大于25kb的长片段PCR，建议采用两步法，将退火/延伸温度合并为68℃，可显著提高扩增特异性。a.最初变性和变性的温度设置为94℃，延伸温度设置为72℃，其余条件不变时，都可以进行正常的PCR扩增，但扩增效果会稍有下降。对于较难扩增的序列，推荐使用92℃变性和72℃延长。b.PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的变性、退火和延伸的温度和时间以及循环数等。c.对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应，循环数需要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。常见问题：1.PCR产物非常少或没有特异性条带。a.引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。b.待扩增片断GC含量偏高。GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难，此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片断的GC-rich buffer，并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。直接添加1-10%DMSO或5-20%甘油对于扩增高GC含量的片段也有帮助。c.PCR反应设置时在室温进行容易导致非特异性条件。推荐在冰浴上设置PCR反应。d.由于引物存在一定的二级结构或存在一定的引物二聚体，或引物偏短，导致退火效果不佳。此时可以采用Touch down等方法进行退火，通常采用从65℃逐步缓慢降温到55或50℃的方法，使退火更加充分。e.退火温度不佳，需要优化。如果有温度梯度PCR仪，则可以设置退火的温度梯度，摸索退火的最佳温度。如果没有温度梯度PCR仪，则可以通过多次PCR反应摸索最佳的退火温度。f.延伸时间不足。可以在推荐的延伸时间基础上把延伸时间延长2-5倍，对于较难扩增的片断可以设置为每1kb延伸1分钟。g.待扩增片断GC含量较高或长度较长，变性不够充分。可以调节起始变性条件至94℃ 2-4min甚至94℃ 5min。h.在不同PCR仪上进行PCR反应，避免有时PCR仪出现问题。i.循环数不足，适当延长PCR的循环数。通常循环数最高不必超过40，常用的循环数范围为25-35。j.模板含量太低，适当加大模板量，或采用巢式PCR(nested PCR)或二次PCR。巢式PCR即为在原先设计的PCR引物内侧再设计一对PCR引物，然后对第一次PCR产物进行稀释后再进行一次PCR扩增，这样一方面可以起到扩增作用，同时也可以从第一次PCR产物中扩增出特异性条带。二次PCR则为比较简单地用原有引物对第一次PCR产物进行稀释后再进行一次PCR扩增，可以起到扩增作用，但不能去除非特异性条带。k.模板中含有抑制PCR反应的物质，可以用适当的DNA纯化方法例如柱纯化等纯化模板DNA。l.对PCR引物进行脱盐纯化。m.使用高质量的dNTP混合物。n.适当增加DNA polymerase的用量。o.当产生较多非特异性条带时，可以适当提高退火温度。p.注意设置适当的阳性对照和阴性对照通常会有很大帮助。q.使用完整、高纯度、高质量的DNA模板，且避免模板反复冻融。长片段DNA反复冻融过程中可能会出现断裂的问题。r.Mg2+浓度较低，或Mg2+与dNTP的比例不合适。使用本产品中提供的缓冲液就无需担心镁离子浓度的问题。s.根据片段大小选择合适的琼脂糖凝胶浓度和电泳条件。大片段DNA的电泳需要使用低浓度的琼脂糖凝胶和较低的电泳电压，并电泳较长的电泳时间。t.PCR反应体系中有气泡或者溶液蒸发。2.杂带较多或条带弥散a.退火温度提高2-5℃。b.减少DNA模板的用量。c.PCR反应设置时在室温进行容易产生非特异性条带。推荐在冰浴上设置PCR反应。d.适当减少 Extra-long DNA Polymerase的用量。e.适当缩短延伸时间。

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阿拉丁：推动发现，推进科学

在阿拉丁，我们将尖端科学与不懈的进步融合在一起。阿拉丁成立于2008年，以其卓越的试剂而闻名，从化学试剂、生化试剂、配体到蛋白质和抗体。我们拥有700多名员工，拥有多个生产工厂和研发中心，我们对卓越科学和产品质量的承诺坚定不移。（详细了解阿拉丁请点击: https://www.aladdin-e.com/zh_cn/about-aladdin）

化学创新的发源地：建筑面积28,000平方米的阿拉丁上海第一工厂。

阿拉丁生化进步的灯塔：阿拉丁第二工厂建筑面积36,000平方米，生产用于药物开发的必需砌块、生化试剂和配体。

阿拉丁美国运营中心：加强与国际市场的合作交流，推动阿拉丁在全球范围内的发展。

阿拉丁的研发中心：引领科技创新

阿拉丁在创新方面的投资，自2016年以来：阿拉丁建立了2个最先进的研发中心，以促进开创性研究和2个重点功能实验室。

（更多内容见: https://www.aladdin-e.com/zh_cn/rd_and_innovation）

化学研发中心（成立于2016年）投资：8000万元。重点：化学和药物化学领域的砌块、催化剂和配体。成就：独立合成了超过10000个构建块分子。

生物研发中心（成立于2021年）投资：1.2亿元。重点：蛋白质和抗体研发，采用哺乳动物瞬时表达和杂交瘤开发等平台。团队：由世界知名专家组成，包括免疫学家、化学家和生物化学家。

药物配体及靶点研发实验室（成立于2022年）投资：1500万人民币。重点：研究药物配体和靶标之间的相互作用，药物配体和化合物筛选工具开发，包括合成和表达更多配体的高通量自动化系统。

 

阿拉丁的品质承诺：建立试剂的黄金标准

在阿拉丁，质量不仅仅是一个基准——它是我们存在的本质。为什么质量对我们很重要：

产品卓越：我们坚定不移的奉献精神确保每件产品都发挥最佳性能，始终超出预期。

客户满意度：我们理解您对我们的信任，我们的使命是提供不仅满足而且提高您的标准的产品。

遵守监管：我们精心调整我们的流程和产品，使其符合严格的监管要求和标准，保证您的产品具有最高的完整性。

选择阿拉丁，您就选择了品质传承。浏览我们确保QC质量品质的世界级仪器：

深入研究分子细节：见证阿拉丁的400MHz核磁共振(NMR)波谱仪的力量揭示化合物错综复杂的结构细微差别。

提高研究精度：阿拉丁近千万元级仪器600MHz核磁共振波谱仪(NMR) 

微观放大：阿拉丁最先进的日立场发射扫描电子显微镜(SEM)使研究人员能够在超结构水平上对固体物质的复杂形态和成分提供无与伦比的见解。

深入研究分子复杂性：阿拉丁的技术专家凭借精准度和专业知识，使用WATERS液相色谱-质谱仪(UPLC-MS)，熟练地分离和破译复杂的有机混合物。

阿拉丁的质量体系:国际认证

我们对科学界的承诺不仅仅有言语上的支持。在阿拉丁，我们致力于提供无与伦比的产品和服务，并通过国际认可的认证得到加强：

·ISO 9001:2015认证 ——证明我们的质量管理体系。

·ISO 17025:2017认证 ——反映了我们在实验室运营方面的卓越表现。

·CNAS认证 ——肯定了我们实验室的管理体系、设备、人员素质、测试方法和技术能力。

·ISO 13485认证 ——这是对我们在生物产品如活性蛋白和抗体方面膜生产能力的认可。

阿拉丁蛋白和抗体生产中心：生物医学创新的未来

活性功能研究：在阿拉丁蛋白质表达实验室的范围内，先进的设备和专业知识汇聚在一起。在这里，我们经验丰富的科学家深入研究蛋白质表达和功能，开拓性突破并确保每次分析开发都体现生命科学领域精确性和可靠性的巅峰。

纯度和精确度的巅峰：阿拉丁的蛋白质纯化实验室是科学严谨和进步的灯塔。在这里，我们的专业人员利用尖端工具来分离和研究最纯净形式的蛋白质，确保我们的研究和成果始终满足生命科学领域清晰度和准确性的最高标准。利用精确的本质：阿拉丁的蛋白质纯化仪是现代生物技术创新的缩影。这种最先进的设备经过精心校准，能够以无与伦比的精度纯化蛋白质，确保我们的研究在广阔的生命科学领域保持在精度和可靠性的前沿。

精确解读蛋白质：在阿拉丁蛋白质印迹实验室的空间内，创新与专业知识相结合。我们的专家采用先进的技术和工具在分子水平上探测和分析蛋白质。这个空间证明了我们致力于理解蛋白质相互作用和表达，使我们处于生命科学研究和发现的前沿。 

卓越保存：在阿拉丁最先进的冻干机中，我们强调冷冻干燥的完美性。我们的设备可保护生物样品的内在特性，以实现长期储存，突显了我们对研究诚信的奉献精神。

阿拉丁的蛋白质冻干实验室：在这里，我们将先进的冷冻干燥技术与深厚的专业知识相结合。我们的任务-确保蛋白质长时间保留其天然结构和功能，支持突破性的研究和应用。

在阿拉丁，我们的电融合和电穿孔系统是创新和精度的证明。在这个高科技领域，我们利用受控电脉冲实现无缝细胞融合，并将外源DNA引入细胞中。我们致力于开发先进的方法，确保获得准确、可重复的结果，从而实现基因研究和细胞研究的突破。 

精密电穿孔：阿拉丁的电穿孔系统采用经过专业校准的电场，使细胞能够高效摄取DNA。这种先进的工具可确保可靠的遗传研究和变革性细胞研究。

阿拉丁的分子掌握：在我们的分子生物学实验室中深入了解基因和分子的复杂世界。利用尖端技术和工具，我们解读大自然最微小的蓝图，推动基因研究和生物技术创新的前沿发展。  

捕捉看不见的事物：阿拉丁的激光共聚焦扫描显微镜(CLSM) 提供无与伦比的清晰度和深度的成像。借助精确的激光聚焦，我们的CLSM深入微观领域，揭示复杂的细节并解开细胞景观的秘密。

阿拉丁的流式洞察：走进我们的流式细胞术实验室，在这里细胞复杂性与高级分析相结合。在这里，单个细胞流动、被照亮并揭示其独特的特征，使我们能够获得精确的数据和深入的生物学理解。 

揭示细胞动力学：在阿拉丁细胞功能实验室，我们深入研究复杂的细胞世界，探索它们的行为、相互作用和在更大系统中的作用。我们的团队利用最先进的设备，深入研究细胞功能的奥秘，为突破性的发现铺平道路。

细胞水平的联合：在阿拉丁细胞融合实验室的空间内，我们探索细胞组合的迷人领域。我们的专业团队利用尖端技术，研究融合细胞的机制、应用和潜力，加深我们的理解并实现新颖的生物医学创新。 

精密筛选中心：在阿拉丁筛选实验室，我们专注于单克隆和杂交瘤细胞的细致筛选。我们的团队将专业知识与先进方法相结合，确保分离出优质细胞系，从而推动后续研究和应用的卓越发展。探索奉献精神与尖端技术的交叉点，以实现细胞的完美。

细胞卓越：阿拉丁细胞库精心保护重要细胞系，确保其寿命和保存。它是持续研究和科学完整性的基石。 

精确可视化：阿拉丁的凝胶成像系统为研究人员提供了无与伦比的DNA和蛋白质可视化清晰度，提高了准确性并简化了分析。这是我们研究的清晰有效。

多功能性：阿拉丁综合实验室是各种研究活动的结合体，配备了最先进的工具。在这里，我们进行广泛的科学探索，确保每项研究都以精确性和可靠性为基础。 

运动效率：阿拉丁落地式离心机可快速、精确地分离样品，从而实现一致的结果和优化的工作流程。这些坚固的机器体现了我们致力于快速、准确地推进研究的奉献精神。

精度与效率：阿拉丁的酶标仪使我们的研究人员能够快速、准确地读数。该工具专为高通量分析而设计，对于在我们的研究中获得无与伦比的一致性结果至关重要。 

消毒中心：阿拉丁消毒室是我们清洁和安全的堡垒。它配备了先进的灭菌技术，可确保我们所有的工具和样品不受污染物的影响，维护我们对纯粹、不妥协的研究的承诺。

最佳生长环境：阿拉丁培养箱为培养和研究生物样本提供了理想的条件。通过精确的温度和气体控制，它们可以保证一致、可靠的结果，确保我们的研究在最好的环境中蓬勃发展。

紧凑高效：Aladdin 台式离心机以节省空间的设计提供快速、精确的样品分离。

精确清洗：Aladdin的微孔板清洗机可确保一致、彻底的板清洗，以获得最佳检测结果。

稳定运动：阿拉丁摇床可确保均匀混合，这对于一致的实验结果至关重要。 

每个液滴的精确度：Aladdin的微滴式数字PCR(ddPCR) 提升了分子分析的标准，可对目标DNA进行超灵敏和绝对定量。我们的ddPCR利用液滴分配的力量，确保高精度检测和卓越的重现性，将研究准确性提升到新的高度。

精确扩增：我们的系列PCR系统在扩增过程中提供无与伦比的一致性和准确性。这些仪器配备了最新的热循环技术，专为实现最佳DNA复制和分析而设计。它们证明了阿拉丁致力于精确可靠地推进分子生物学研究。 

重新定义卓越的细胞分选：阿拉丁的 BD FACSymphony?S6细胞分选仪代表了先进流式细胞术的巅峰。这款最先进的仪器具有无与伦比的准确性和广泛的多参数检测能力，简化了细胞分选过程并确保最大程度的样品完整性，是继 阿拉丁的600MHz核磁共振波谱仪（NMR）后购置的另一台近千万元级仪器，可配置多达50个参数，它非常适合复杂的研究应用，重申了我们对尖端科学的承诺。