Hi-C(High-throughput/resolution chromosome conformation capture)主要步骤是先制备适合Hi-C的3C模板,限制酶切割后末端连接生物素标记的核苷酸。钝端连接之后DNA纯化剪切。生物素pull-down保证只有连接的部分用于分析。读长reads被定位到基因组上,当这一对读长发现在不同片段上的时候,对互作片段进行相应评分。这样,一个包含基因组所有片段的连接频率矩阵被构建。Lieberman-Aiden等发现,哺乳动物HiC试验的分辨率为~1Mb(~10 RMPD,million paired-end reads)。通过4C确定试验在Hi-C可以得到验证。Hi-C试验让科学家们发现,核内存在特定的染色质区隔(Chromatin Compartment),染色质和异染色质在不同的区域(Open区和Close区)。Cell等发现,人类不同类型细胞系,细胞核染色质组织大致相同。总之,Hi-C方法是全基因组范围内,不限制特定互作蛋白为局限,利用高通量测序(二代或三代)的基于“全对全”模式的染色质互作构象分析方法。在人类,小鼠上都有相关发现发表。
数据支持