G-418硫酸盐

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G-418硫酸盐

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货号：CG5471

品牌：Coolaber/酷来搏

计量单位：瓶

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：7

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产品详情

产品说明: G418 Sulfale(G418 硫酸盐),也称作 Geneticin〈遗传霉素),是一种结构类似于庆大霉素 B1(GentamycinB1)的氨基糖苷类抗生素，通过影响 805 核糖体功能和阻断延伸步骤来干扰蛋白合成，对原核和真核等细胞都有毒性，包括细菌、酵、高等植物和哺乳动物细胞，也包括原生动物和虫，其抗性基因(主要为neo 基因)位于转座子Tn601(903)成Tn5(米源于细菌)，但是可以在真校细胞中表达。通过基因重组技术将这些抗性基因导入细胞，使其获得对 G418的耐药性，从而用来选和维持培养携带抗性基因的原核或者真核细胞。哺乳动物细胞中，当抗性基因ne0 被整合进真核细胞基因组后，使其编码表达氨基糖苷磷酸转移酶(amino-glycoside 3’-phosphotransfcrase，APH(3)7T)，此酶通过共价修饰 G418的氨基或经基功能，抑制抗生素-核糖体间的相互作用，从而使得抗生素失活，这一特性赋子细胞产生抗性。稳转细胞株筛选实验，需要建立杀灭曲线(剂量反应曲线)确定杀死无抗性细胞的最低有效浓度。植物细胞中，通过转染携带nptI基因的抗性质粒赙有其抗性。npI基因也能编码表达氨基苷磷酸转移酶，这个使得多种抗生素丧失活性，包括 G418，卡那霉素和巴龙霉素。使用方法: 1.G418 储存液的配制(20 mgml，活性浓度) 1、活力单位的换算根据公式换算:(1000/A6)xAI=A:，其中 A是G418的活力值(Potency)，因批次而异，可见批次对应的质检报告，或者瓶子上的标签。A是想配制的话性 G418 浓度。A:是实际称重的粉末与体积比浓度。例如:G418活力值为:750mgmg，要配制50mg'mL的 G418 活性浓度，则实际要配制的粉末浓度为1000/750x50 mgmL-66.33 mgmL。如果配制 10mL的 G418储存液(活性浓度，50 mg'mL)，则需要称取663.3 mg 粉末。 2、除菌和保存根据上述换算得到的实际粉末称重，加入 10m 无菌去离子水内使其完全溶解。0.22um 过滤，除菌后分装放到-20”C冻存，1年稳定。注:不建议使用液体培养基、氧化钠溶液、酸盐溶液，或者有机溶剂来制各储存液。2.常用筛选浓度通常情况，哺乳动物细胞简选范围 200-2000g'mL;植物细胞:10-100g'mL;醇母细胞:500-1000ug'mL. 刚开始筛选转化子需要高浓度的 G418，后续用较低浓度的 G418 维持培养。生长条件、细胞类型、环境因素都可能影响 G418的用量，因此建设新建实验体系通过杀灭曲线(kilcune)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

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