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DeepBio得分:5567.2
DeepBio得分
是基于文献引用次数，影响因子，文献新近度等因素计算的客观产品评级，得分越高表明该产品经过越可靠的实验验证，质量可信度越高
完成环境总基因组DNA抽提后，利用1%琼脂糖凝胶电泳检测抽提的基因组DNA。
按指定测序区域，合成带有barcode的特异引物。
为保证后续数据分析的准确性及可靠性，需满足两个条件，1) 尽可能使用低循环数扩增；2) 保证每个样本扩增的循环数一致。随机选取具有代表性的样本进行预实验，确保在最低循环数中使绝大多数样本能够扩增出浓度合适的产物。
PCR 采用TransGen AP221-02：TransStart Fastpfu DNA Polymerase；
PCR仪：ABI GeneAmp® 9700型；
全部样本按照正式实验条件进行，每个样本3个重复，将同一样本的PCR产物混合后用2%琼脂糖凝胶电泳检测，使用AxyPrepDNA凝胶回收试剂盒（AXYGEN公司）切胶回收PCR产物，Tris_HCl洗脱； 2%琼脂糖电泳检测。
参照电泳初步定量结果，将PCR产物用QuantiFluor™ -ST蓝色荧光定量系统（Promega公司）进行检测定量，之后按照每个样本的测序量要求，进行相应比例的混合。
1) 连接“Y”字形接头；
2) 使用磁珠筛选去除接头自连片段；
3) 利用PCR扩增进行文库模板的富集；
4) 氢氧化钠变性，产生单链DNA片段。
1) DNA片段的一端与引物碱基互补，固定在芯片上；
2) 另一端随机与附近的另外一个引物互补，也被固定住，形成“桥 (bridge)”；
3) PCR扩增，产生DNA簇；
4) DNA扩增子线性化成为单链。
5) 加入改造过的DNA聚合酶和带有4种荧光标记的dNTP，每次循环只合成一个碱基；
6) 用激光扫描反应板表面，读取每条模板序列第一轮反应所聚合上去的核苷酸种类；
7) 将“荧光基团”和“终止基团”化学切割，恢复3'端粘性，继续聚合第二个核苷酸；
8) 统计每轮收集到的荧光信号结果，获知模板DNA片段的序列。
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