组织蛋白提取:在组织蛋白提取过程中,一般推荐加用蛋白裂解液(磷酸酶和蛋白酶抑制剂)后,冰上研磨、匀浆化处理组织。组织来源不同,蛋白的产出亦不相同。
蛋白定量
蛋白定量的方法有很多种,应用较多的主要有两种:BCA蛋白定量检测法和Bradford蛋白定量检测法,市售的蛋白定量试剂盒也多基于上述两种检测方法而开发的。两种方法均需配制蛋白标准品,蛋白与定量试剂经过一定时间的反应(BCA法反应为37℃、20-30min,Bradford法反应一般为37℃,5min),酶标仪读取样品的OD值,绘制的蛋白标准曲线,依据标准曲线计算WB蛋白的浓度。
BCA蛋白质定量试剂盒(兼容SDS),AMJ-KT0009;
Bradford蛋白质定量试剂盒(兼容DTT),AMJ-KT0009
BCA法与Bradford法应如何选择?
这主要由样本中的干扰物质决定。如果你的蛋白抽提试剂中含有大量去垢剂且不含有螯合剂、还原剂时,可使用BCA法;如果你的蛋白里含有EDTA等金属螯合剂或者含有还原型物质,且不含有去垢剂时,可使用Bradford法。
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