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DeepBio得分:5567.2
DeepBio得分
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将叶片经-80 ℃冷冻干燥至恒重后，低温研磨至粉末状进行磷组分测定。
植物总磷及磷组分均应用钼蓝显色法，用分光光光度计在620 nm吸光度下测定。其中，植物无机磷采用0.5 ml 1%的乙酸（v/v）提取测定。在多次震荡提取过程中用冰盒降温，防止叶片中的有机磷分解转化为无机磷，造成试验误差（严理，2019）。其余植物磷组分拟采用 Yan 等（2019）方法测定，测定的磷组分包括：脂质磷（Phospholipids P）、初级代谢磷 （Primary P，包含代谢磷（Metabolic P）、无机磷（Pi））、核酸磷（Nucleic acids P）和残渣磷（Residual P）（严理，2019）。初级代谢磷与无机磷的差值即为真正代谢磷。根据不同磷组分浓度占总磷含量的百分比计算磷组分含量百分比（%）。
具体测试步骤如下：
a. 50 mg 植物样品粉末放入至2 ml离心管中（管1），加入1 ml CMF试剂（氯仿 （Chloroform），甲醇（Methanol），甲酸（Formic acid）按照 12：6：1 体积配比）混匀离心（5000 rpm，10 min），吸取上清液至10ml新离心管（管2），重复此过程2次；
b. 将管1剩余植物样品中加入1.26 ml CMW试剂（氯仿，甲醇，纯水按照1：2：0.8体积配比）混匀后离心（4000 rpm，10 min）， 吸取上清液至管2，重复此过程2次；
c. 将管2中加入1.9 ml CWW试剂（2 ml氯仿与18 ml纯水混合后的上层液体）混匀离心（4000 rpm，10 min），将管2上层液体移至瓶1，下层液体移至瓶2，瓶2深色提取液为脂质磷（严理，2019）；
d. 管1经氮气吹干仪干燥后，加入1 ml 85 %甲醇试剂，混匀后离心（5000 rpm，10 min），将上清液转移至瓶1；
e. 管1氮吹干燥后，加入1 ml 5 % 三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）试剂，在 4 ℃环境下震荡混匀后离心（5000 rpm，10 min），将上清液转移至瓶1；此步骤重复1 次，瓶1提取液为初级代谢磷（包含无机磷和代谢磷）；
f. 向管1中加入1 ml 2.5%TCA试剂，95℃水浴加热1小时，充分混合后离心（5000 rpm，10 min），将上清液转移至瓶3；此步骤重复2次，瓶3中提取液为核酸磷（严理， 2019）；
g. 将管1中植物样品固体用少量2.5%TCA洗入瓶4得到残渣磷（严理，2019）； h. 用氮气吹干仪将瓶1、2、3、4干燥后，用浓硝酸/高氯酸（3 ml：1 ml）对瓶中提取物进行消解，用超纯水将消煮液定容至10 ml离心管中，用钼蓝显色法测定。
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