DeepBio得分:5567.2
DeepBio得分
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本项目采用 DIA定量蛋白质组学技术开展课题研究,在 72 个样本中共鉴定到蛋白质 15579 个,其中定量蛋白质 15579 个。按照表达倍数变化 2.0 倍以上(上调大于 2.0 倍或者下调小于 0.50 倍)且 P value< 0.05 的标准进行显著性差异表达蛋白质的筛选。以 YMM.vs.DMM 比较组为例,其中有 262 个蛋白质的表达水平发生显著性变化,113 个蛋白质显著性上调,149 个蛋白质显著性下调(其它比较对差异筛选数据详见:蛋白差异分析结果)。基于上述数据,对所有鉴定到的蛋白质进行了系统的生物信息学分析(蛋白功能注释),并对所有差异表达蛋白进行了功能富集及蛋白互作网络分析。具体的工作流程和分析内容如下:
数据非依赖性的扫描模式(Data-independent acquisition, DIA)是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。可以依据质荷比(m/z)将质谱整个扫描范围分为若干个窗口,然后对每个窗口中的所有母离子进行碎裂、检测,采集所有母离子的碎片离子信息进行蛋白定性和定量。目前流行的蛋白质组学研究手段,如iTRAQ/TMT、Label-free、SILAC采用的都是数据依赖性的扫描模式(Data-dependent acquisition, DDA),一级质谱进行全扫描采集母离子信号生成一级谱图,二级质谱依次选择一级谱图中信号强度排序为top10/20/40的峰进行碎裂并采集对应的子离子信息。
1)采集一级质谱full scan的全部母离子及对应的二级质谱子离子信息,具有更高的数据覆盖度;
(2)二级质谱分“窗口”进行数据采集,减少数据采集的随机性,具有更高的检测重现性和稳定性,适用于大批量样品的蛋白质组学分析;
(3)依靠多个循环的多个子离子对蛋白质进行定量,定量精密度、准确性、线性范围大大提高;
(4)使用内标校正肽段(iRT KIT)对不同样品的保留时间进行校正,可对不同批次的样品进行蛋白定量分析。
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