多重荧光免疫组化技术 (Multiplex Immunohistochemical,mIHC) 是为了解决传统技术在研究肿瘤免疫微环境中的弊端而生的一项技术,它作为近几年全球热点技术,在肿瘤治疗、神经科学、干细胞研究、器官移植等多个领域都有重要的研究成果报道,为多种疾病精准诊疗指明了新方向。
多重荧光免疫组化(mIHC),主要的技术原理来自TSA技术,TSA即酪酰胺信号放大(Tyramide signal amplification)是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该技术可与高性能染料Alexa Fluor®、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。
TSA主要原理是利用酪胺 Tyramide 的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点),产生大量的酶促产物,该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合,这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积,与随后加入的 Streptavidin—HRP/荧光基团结合,经几次这样的循环放大,可以结合大量的酶分子or荧光基团,结果使其检测信号得到几何级放大。
mIHC的应用的场景是非常的广泛的,比如:组织微环境特征分析及生物标记物发现;临床试验病人入组分析;生物标志物定量检测及药效预测和预后评估;分析疾病微环境中各种类型细胞间的空间分布关系;复杂细胞表型、功能状态的判别;分子分型;TILs(肿瘤浸润淋巴细胞)分析、肿瘤浸润边界特征分析;用于推演信号通路上、下游分子协同表达的关系等。
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