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免疫共沉淀
1. 组织/细胞甲醛交联、终止交联(蛋白-DNA 形成共价键)
2. 组织细胞的破碎,释放胞质容物,收集细胞核
3. 细胞裂解,提取 DNA-蛋白质可溶复合物
4. DNA 片段化,将 DNA 打断成 200-1000bp 的片段
5. 免疫沉淀目标蛋白-DNA 复合物
6. 沉淀复合物的洗涤
7. 沉淀复合物的洗脱
8. DNA-蛋白质复合物的解交联和 DNA 提取
9. 沉淀 DNA 的质量检测
10. 免疫沉淀结果的蛋白检测(Western Blot)
11. 免疫沉淀 DNA 的文库构建
二、DNA文库构建
1. 对 IP 下来的 DNA 进行末端修复,加碱基 A,
2. 对修复、加 A 的 DNA 加测序接头处理;
3. 利用磁珠回收目的大小片段并进行 PCR 扩增,获得待测序文库;
4. 利用琼脂糖电泳方法对所构建的文库进行质检;
5. 利用 Qubit 2.0 对文库进行定量,确定文库浓度是否适合上机;
6. 文库质检合格后,把不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求在MGISEQ-T7测序仪上进行上机测序。
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